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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-22 18:12:54瀏覽次數(shù):261次
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人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
51046 C12ORF50 12號染色體開放閱讀框50抗體 0.2ml
51047 AQP3 水通道蛋白-3抗體 0.1ml
51048 C12ORF53 12號染色體開放閱讀框53抗體 0.2ml
51049 C12ORF54 12號染色體開放閱讀框54抗體 0.2ml
51050 phospho-AQP2(Ser269) 磷酸化水通道蛋白2抗體 0.1ml
51051 C12ORF61 12號染色體開放閱讀框61抗體 0.2ml
51052 C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體 0.2ml
51053 C12ORF68 12號染色體開放閱讀框68抗體 0.2ml
51054 CRCT1 富含半*C端蛋白1抗體 0.2ml
51055 CREG2 E1A激活基因刺激蛋白2抗體 0.2ml
51056 CWF19L1 CWF19L1蛋白抗體 0.2ml
51057 CWH43 細(xì)胞壁合成蛋白43抗體 0.2ml
51058 Cactin/C19orf29 19號染色體開放閱讀框29抗體 0.2ml
51059 MMAA/cblA 甲基丙二酸尿癥cblA抗體 0.2ml
51060 CREPT 腫瘤高表達(dá)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
51061 LCA5L 致盲基因LCA5樣蛋白抗體 0.2ml
51062 LCA5 致盲基因LCA5蛋白抗體 0.2ml
51063 C21ORF56 21號染色體開放閱讀框56抗體 0.2ml
51064 C21ORF62 21號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
51065 C21orf128 21號染色體開放閱讀框128抗體 0.2ml
51066 C21orf2 21號染色體開放閱讀框2抗體 0.2ml
51067 C21orf58 21號染色體開放閱讀框58抗體 0.2ml
51068 C21orf70 21號染色體開放閱讀框70抗體 0.2ml
51069 C21orf55/DnaJC28 21號染色體開放閱讀框55抗體 0.2ml
51070 C21orf55/DnaJC28 21號染色體開放閱讀框55抗體 0.2ml
51071 C21orf87 21號染色體開放閱讀框87抗體 0.2ml
51072 EURL/C21orf91 21號染色體開放閱讀框91抗體 0.2ml
51073 C22orf25 22號染色體開放閱讀框25抗體 0.2ml
51074 HSPC117/C22orf28 22號染色體開放閱讀框28抗體 0.2ml
51075 C22orf36 22號染色體開放閱讀框36抗體 0.2ml
51076 C22orf9 22號染色體開放閱讀框9抗體 0.2ml
51077 C2CD2/C21orf25 21號染色體開放閱讀框25抗體 0.2ml
51078 C2CD4C/NLF3 限局性核因子3抗體 0.2ml
51079 DGCR6L 無胸腺癥關(guān)鍵蛋白6樣抗體(迪格奧爾格綜合征) 0.2ml
51080 C4orf22 4號染色體開放閱讀框22抗體 0.2ml
51081 C4orf14 4號染色體開放閱讀框14抗體 0.2ml
51082 C4orf19 4號染色體開放閱讀框19抗體 0.2ml
51083 C4orf27 4號染色體開放閱讀框27抗體 0.2ml
51084 C4orf42 4號染色體開放閱讀框42抗體 0.2ml
51085 C4orf42 4號染色體開放閱讀框42抗體 0.2ml
51086 C4orf33 4號染色體開放閱讀框33抗體 0.2ml
51087 C4orf44 4號染色體開放閱讀框44抗體 0.2ml
51088 C5ORF33 5號染色體開放閱讀框33抗體 0.2ml
51089 Kappa-casein/CSN3 κ-酪蛋白抗體 0.2ml
51090 Beta-casein β-酪蛋白抗體 0.2ml
51091 Alpha s1 Casein α-s1酪蛋白抗體 0.2ml
51092 Alpha s2 Casein α-s2酪蛋白抗體 0.2ml
51093 DRAM DNA損傷自噬調(diào)整蛋白抗體 0.2ml
51094 AQP4 水通道蛋白-4抗體 0.1ml
51095 AQP5 水通道蛋白5抗體 0.1ml
51096 AQP7 人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒水通道蛋白-7抗體 0.1ml
51097 ABAT γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體 0.2ml
51098 AQP9 水通道蛋白-9抗體 0.1ml
51099 Androgen receptor 雄激素受體抗體 0.1ml
51100 Chondroitin Sulfate *抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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