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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-15 23:22:30瀏覽次數(shù):173次
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人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
50816 EML3 微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體 0.2ml
50817 Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體 0.2ml
50818 ZWILCH 著絲粒ZWILCH蛋白抗體 0.2ml
50819 UFD1L 泛素融合降解樣蛋白1抗體 0.2ml
50820 TSSK6/CT72 睪丸特異*/*激酶6抗體 0.2ml
50821 TSEN2 tRNA剪接內(nèi)切酶2抗體 0.2ml
50822 TPD52L1/D53 腫瘤蛋白D53抗體 0.2ml
50823 EDRF1/C10orf137 紅細胞分化相關(guān)因子1抗體 0.2ml
50824 FASP1/C21orf45 MaFF相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
50825 CNTD 細胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
50826 CNTD2 細胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
50827 ANGEL1 ANGEL1蛋白抗體 0.2ml
50828 ANGEL2 ANGEL2蛋白抗體 0.2ml
50829 ANKLE2 ANKLE2蛋白抗體 0.2ml
50830 ANKMY1 睪丸特異性錨樣蛋白1抗體 0.2ml
50831 ANKRD13B 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 0.2ml
50832 ANKRD20A1 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體 0.2ml
50833 ANKRD20A3 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體 0.2ml
50834 ANKRD22 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體 0.2ml
50835 ANKRD32 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體 0.2ml
50836 ANKRD45/CT117 腫瘤/睪丸抗原117 0.2ml
50837 ANKRD50 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體 0.2ml
50838 ATP6V1G2/V-ATPase G2 氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶6G抗體 0.2ml
50839 ATXN7L3B 共濟失調(diào)7樣蛋白3B抗體 0.2ml
50840 ANKRD26 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 0.2ml
50841 ANKRD26 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 0.2ml
50842 BAT5 白細胞抗原B相關(guān)轉(zhuǎn)錄蛋白5抗體 0.2ml
50843 Ephrin A2/LERK6 Ephrin A2抗體 0.2ml
50844 Brd4/CAP 染色體相關(guān)蛋白CAP抗體 0.2ml
50845 FGF12 成纖維細胞生長因子12抗體 0.2ml
50846 FGF14 成纖維細胞生長因子14抗體 0.2ml
50847 FGF18 成纖維細胞生長因子18抗體 0.2ml
50848 BCL7C B細胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體 0.2ml
50849 phospho-Stathmin 1 (Ser63) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 0.1ml
50850 phospho-Stathmin 1 (Ser24) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 0.1ml
50851 INTS3 集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體 0.2ml
50852 C10orf4/FRA10AC1 10號染色體開放閱讀框4抗體 0.2ml
50853 C10orf47 10號染色體開放閱讀框47抗體 0.2ml
50854 C10orf62 10號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
50855 C10orf81 10號染色體開放閱讀框81抗體 0.2ml
50856 C10orf88 10號染色體開放閱讀框88抗體 0.2ml
50857 C10orf93 10號染色體開放閱讀框93抗體 0.2ml
50858 C10orf63/Enkurin 10號染色體開放閱讀框63抗體 0.2ml
50859 C10orf132/GOLGA7B 10號染色體開放閱讀框132抗體 0.2ml
50860 C10orf30/BEND7 10號染色體開放閱讀框30抗體 0.2ml
50861 C10orf140 10號染色體開放閱讀框140抗體 0.2ml
50862 C1orf125 1號染色體開放閱讀框125抗體 0.2ml
50863 C1orf129 1號染色體開放閱讀框129抗體 0.2ml
50864 C1orf159 1號染色體開放閱讀框159抗體 0.2ml
50865 C1orf163 1號染色體開放閱讀框163抗體 0.2ml
50866 C1orf172 1號染色體開放閱讀框172抗體 0.2ml
50867 C1orf2/COTE1人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒 1號染色體開放閱讀框2抗體 0.2ml
50868 C1orf19/SEN15 1號染色體開放閱讀框19抗體 0.2ml
50869 C1orf25 1號染色體開放閱讀框25抗體 0.2ml
50870 C1orf31 1號染色體開放閱讀框31抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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