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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-03-07 08:44:57瀏覽次數(shù):205次
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人腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
50592 Hirudin 水蛭素抗體 0.2ml
50593 LRP15 富含*重復(fù)序列LRP15抗體 0.2ml
50594 PAR3 蛋白酶激活受體3抗體 0.2ml
50595 phospho-PTPN7(Ser246) 磷酸化非受體型蛋白*磷酸酶7抗體 0.1ml
50596 PAR4 蛋白酶激活受體4抗體 0.2ml
50597 Protein S/PROS 蛋白S抗體 0.2ml
50598 Protein Z 蛋白Z抗體 0.2ml
50599 SERPINI2/PI14 蛋白酶抑制劑14抗體 0.2ml
50600 CTH/CSE/Cystathionase 胱硫醚γ裂解酶抗體 0.2ml
50601 ALAS2/ALAS-E 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體 0.2ml
50602 AMPD3 紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體 0.2ml
50603 AHSP/ERAF α紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體 0.2ml
50604 BPGM 紅細(xì)胞2,3 - 二磷酸甘油酸合成酶抗體 0.2ml
50605 DYRK3 雙特異性*磷酸化調(diào)節(jié)激酶3抗體 0.2ml
50606 phospho-PTPN7(Ser93) 磷酸化非受體型蛋白*磷酸酶7抗體 0.1ml
50607 FECH/Ferrochelatase 鐵螯合酶抗體 0.2ml
50608 MPP1/EMP55 紅細(xì)胞膜蛋白55抗體 0.2ml
50609 Mitoferrin 1 線粒體鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.2ml
50610 PIGA 紅細(xì)胞磷脂酰肌醇聚糖A抗體 0.2ml
50611 Factor H 補(bǔ)體因子H抗體 0.2ml
50612 EKLF/KLF1, 2, 4 上皮鋅指蛋白1, 2, 4抗體 0.2ml
50613 ALAS1/ALAS-H 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體 0.2ml
50614 C6orf64 6號染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml
50615 C6orf192 8號染色體開放閱讀框192抗體 0.2ml
50616 TSBP 睪丸特異蛋白抗體 0.2ml
50617 AKD1 腺苷酸激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
50618 C6orf1 6號染色體開放閱讀框1抗體 0.2ml
50619 C6orf120 6號染色體開放閱讀框120抗體 0.2ml
50620 α-TAT α微管蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
50621 C6orf150 6號染色體開放閱讀框150抗體 0.2ml
50622 C6orf174 6號染色體開放閱讀框174抗體 0.2ml
50623 C6orf58 6號染色體開放閱讀框58抗體 0.2ml
50624 Orai2 跨膜蛋白Orai2抗體 0.2ml
50625 BAAT1/C7orf27 7號染色體開放閱讀框27抗體 0.2ml
50626 CCZ1 CCZ1蛋白抗體 0.2ml
50627 MMS21/NSE2 E3連接酶MMS21蛋白抗體 0.2ml
50628 C9orf86 9號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml
50629 FIBCD1 含纖維蛋白原C結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
50630 PGGT1A/FNTA 蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1α抗體 0.2ml
50631 PGGT1B/FNTB 蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1β(FTβ)抗體 0.2ml
50632 FRG2B FRG2B蛋白抗體 0.2ml
50633 CXorf56 X染色體開放閱讀框56抗體 0.2ml
50634 BEND2/CXorf56 BEND2蛋白抗體 0.2ml
50635 CXorf21 X染色體開放閱讀框21抗體 0.2ml
50636 CXX1/Cerebral protein 5 腦蛋白5抗體 0.2ml
50637 GTPBP9 *核苷酸結(jié)合蛋白9抗體 0.2ml
50638 GLT8D1 糖基轉(zhuǎn)移酶8結(jié)構(gòu)域1抗體 0.2ml
50639 GLT8D1 糖基轉(zhuǎn)移酶8結(jié)構(gòu)域1抗體 0.2ml
50640 GLTPD2 糖脂轉(zhuǎn)移蛋白結(jié)構(gòu)域2抗體 0.2ml
50641 NTAL B淋巴細(xì)胞鏈接激活蛋白抗體 0.2ml
50642 KRCC1 人腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒 含賴氨酸卷曲螺旋蛋白1抗體 0.2ml
50643 LACTB2 β內(nèi)酰胺酶樣蛋白2抗體 0.2ml
50644 LAPTM4A 溶酶體相關(guān)膜蛋白4α抗體 0.2ml
50645 LMBR1/DIF14 分化相關(guān)基因14抗體 0.2ml
50646 VMAT2 腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人腫瘤血管生長因子(TAF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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