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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-16 17:07:32瀏覽次數(shù):145次
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人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
50483 APAF1(CT) 凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端) 0.1ml
50484 ANKRD42 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體 0.2ml
50485 CARKD 碳水化合物激酶結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)抗體 0.2ml
50486 CASD1/C7orf12 第七號染色體開放閱讀框12抗體 0.2ml
50487 CASKIN2 皮膚相互作用蛋白2抗體 0.2ml
50488 CC85C 卷曲螺旋域蛋白質(zhì)85C抗體 0.2ml
50489 ODF3/CT135 腫瘤/睪丸抗原135抗體 0.2ml
50490 OIF 骨誘導(dǎo)因子抗體 0.2ml
50491 PRR15 富含*蛋白15抗體 0.2ml
50492 TRIM10/RNF9 環(huán)指蛋白9抗體 0.2ml
50493 TSPAN1 四分子交聯(lián)體1抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50494 TSPAN2 四分子交聯(lián)體2抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50495 TSPAN3 四分子交聯(lián)體3抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50496 TSPAN4 四分子交聯(lián)體4抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50497 TSPAN5 四分子交聯(lián)體5抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50498 TSPAN6 四分子交聯(lián)體6抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50499 TSPAN6/TALLA-1/CD231 T細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞白血病相關(guān)抗原抗體 0.2ml
50500 TM4SF3 TM4SF3蛋白抗體 0.2ml
50501 TSPAN10/Oculospanin 四分子交聯(lián)體10抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50502 TSPAN12/NET-2 四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50503 TSPAN13/NET-6 四分子交聯(lián)體13抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50504 TSPAN14 四分子交聯(lián)體14抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50505 TSPAN16/TM4-B 四分子交聯(lián)體16抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50506 TSPAN17/FBX23 四分子交聯(lián)體17抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50507 TSPAN15/NET-7 四分子交聯(lián)體15抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50508 TSPAN20/UPIb 四分子交聯(lián)體20抗體(四旋蛋白) 0.2ml
50509 TMIGD1 跨膜TMIGD1蛋白抗體 0.2ml
50510 Tal1 T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病1蛋白/淋巴瘤蛋白5抗體 0.2ml
50511 TXNDC9 胚胎干細(xì)胞相關(guān)蛋白TXNDC9抗體 0.2ml
50512 HSPB7/cvHSP 熱休克蛋白β7抗體 0.2ml
50513 KCTD5 鉀離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 0.2ml
50514 GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體 0.2ml
50515 FIGNL1 FIGNL1蛋白抗體 0.2ml
50516 APC70/CRSP70 轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體 0.2ml
50517 PAP-α/β/γ 多聚合酶α/β/γ抗體 0.2ml
50518 Geminin DNA復(fù)制抑制因子抗體 0.2ml
50519 FAR1 脂肪?;?還原酶1抗體 0.2ml
50520 BBS5 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS5抗體 0.2ml
50521 FOXO1A 叉頭蛋白O1抗體 0.2ml
50522 MTA2 轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
50523 KChIP2 鉀通道相互作用蛋白2抗體 0.2ml
50524 KCND2/Kv4.2 電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 0.2ml
50525 phospho-KCND2/Kv4.2(Thr602) 磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 0.1ml
50526 phospho-KCND2/Kv4.2(Thr607) 磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 0.1ml
50527 Nav1.5/SCN5A 電壓門控鈉通道5α抗體 0.2ml
50528 PRKAG2/AMPKγ2 腺苷單磷酸活化蛋白激酶γ2抗體 0.2ml
50529 BMP10 骨形態(tài)發(fā)生蛋白10抗體 0.2ml
50530 TSPAN9/NET-5 四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體 0.2ml
50531 TET2 甲基雙加氧酶TET2抗體 0.2ml
50532 5 MethylCytosine 人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒5甲基胞嘧啶抗體 0.2ml
50533 FOG1 GATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體 0.2ml
50534 RGS4 精神分裂癥相關(guān)蛋白9抗體 0.2ml
50535 GPBB/PYGB 腦糖原磷酸化酶抗體 0.2ml
50536 SLC27A6/ACSVL2 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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