糜蛋-白酶(Chymotrypsin)活性測(cè)試盒_微量法
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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-18 12:07:05瀏覽次數(shù):108次
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人c-jun ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人c-jun ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人c-jun ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
50200 ANKS1B/AIDA1 β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
50201 ANKS3 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml
50202 ANKS6 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml
50203 ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體 0.2ml
50204 ARSH 芳香基硫酸酯酶H抗體 0.2ml
50205 ARSK 芳香基硫酸酯酶K抗體 0.2ml
50206 ART3 二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶3抗體 0.2ml
50207 Tankyrase 端粒調(diào)控因子抗體 0.2ml
50208 ART5 二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體 0.2ml
50209 ASB13 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族13抗體 0.2ml
50210 ASC2/POP1 感染性蛋白*蛋白1抗體 0.2ml
50211 ATAD3A/B/C 三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體 0.2ml
50212 MAP4K6/MINK1 絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體 0.1ml
50213 ATAD2 三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體 0.2ml
50214 ASMTL ASMTL蛋白抗體 0.2ml
50215 GPCR TAS1R3 G蛋白偶聯(lián)受體TAS1R3抗體 0.2ml
50216 BAGE2 腫瘤/睪丸抗原2.2抗體 0.2ml
50217 BAGE3 腫瘤/睪丸抗原2.3抗體 0.2ml
50218 BAGE4 腫瘤/睪丸抗原2.4抗體 0.2ml
50219 KMT1C/G9a 組蛋白H3賴氨酸9甲基化1C抗體 0.2ml
50220 COPS8 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體 0.2ml
50221 COPS6 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體 0.2ml
50222 FBXO21 F-box蛋白21抗體 0.2ml
50223 FBXO38 F-box蛋白38抗體 0.2ml
50224 COPS4 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基4抗體 0.2ml
50225 COPS7A 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體 0.2ml
50226 COPS2/TRIP15 甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體 0.2ml
50227 GPS1/CSN1 G蛋白通路抑制蛋白1抗體 0.2ml
50228 Cullin 7 泛素連接酶CUL7蛋白抗體 0.2ml
50229 CDCA7 細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白 0.2ml
50230 ASB12 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族12抗體 0.2ml
50231 ASB4 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體 0.2ml
50232 ASB9 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體 0.2ml
50233 ASB8 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體 0.2ml
50234 phospho-GPS1/CSN1(Ser474) 磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 0.1ml
50235 ASB7 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族7抗體 0.2ml
50236 ASB17 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族17抗體 0.2ml
50237 ASB5 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族5抗體 0.2ml
50238 ZSWIM2 E3泛素蛋白連接酶ZSWIM2抗體 0.2ml
50239 ZSWIM3 ZSWIM3蛋白抗體 0.2ml
50240 ZNRF1 鋅指/環(huán)指蛋白1抗體 0.2ml
50241 ZNRF2 鋅指/環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml
50242 ZNRF3 鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體 0.2ml
50243 ZNRF4 鋅指/環(huán)指蛋白4抗體 0.2ml
50244 ZNF230/RNF141 鋅指蛋白230抗體 0.2ml
50245 UBR2 泛素蛋白連接酶E3α2抗體 0.2ml
50246 UBOX5/RNF37 泛素結(jié)合酶7相互作用蛋白5抗體 0.2ml
50247 TTC33 TTC33蛋白抗體 0.2ml
50248 TTC3/RNF105 環(huán)指蛋白105抗體 0.2ml
50249 TRIM11/RNF92 環(huán)指蛋白92抗體 0.2ml
50250 TRIM35 TRIM35蛋白抗體 0.2ml
50251 TRIM41 環(huán)指蛋白調(diào)節(jié)蛋白激酶C蛋白抗體 0.2ml
50252 TRIM50 TRIM50蛋白抗體 0.2ml
50253 TRIM5α/RNF88 環(huán)指蛋白88抗體 0.2ml
50254 TRIAD3 鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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