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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
50032 ox-LDL 氧化低密度脂蛋白抗體 0.1ml
50033 FSIP1 纖維性鞘結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
50034 GNRPX/PLEKHJ1 *核苷酸結(jié)合蛋白X抗體 0.2ml
50035 GPKOW G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 0.2ml
50036 GRAMD2 GRAM結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
50037 PMS1 腫瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS1抗體 0.1ml
50038 GRAMD3/NS3TP2 丙型肝炎病毒-NS3反轉(zhuǎn)錄激活蛋白2抗體 0.2ml
50039 TNIK TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 0.2ml
50040 GSTCD *硫轉(zhuǎn)移酶C段結(jié)構(gòu)域抗體 0.2ml
50041 GTDC1 糖基轉(zhuǎn)移酶樣1抗體 0.2ml
50042 phospho-IKKi/IKKe(Ser172) 磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i抗體 0.1ml
50043 PXMP1/ABCD3 過(guò)氧化物酶膜蛋白1抗體 0.2ml
50044 phospho-TNIK(Ser764) 磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 0.1ml
50045 Arginase 1 *酶1抗體 0.2ml
50046 GIPC-2 胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體 0.2ml
50047 DOK5/IRS6 胞漿接頭蛋白Dok5抗體 0.2ml
50048 NETO1 腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體 0.2ml
50049 Transglutaminase 2/TGase2 轉(zhuǎn)*酶2抗體 0.2ml
50050 RanBP7/Importin 7 RAN結(jié)合蛋白7抗體 0.2ml
50051 phospho-TNIK(Ser769) 磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗體 0.1ml
50052 IL-9 白介素9抗體 0.1ml
50053 ERM/Etv5 轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體 0.2ml
50054 UGCG/Ceramide glucosyltransferase 葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶抗體 0.1ml
50055 ACTBL1/Ovary 卵巢、胎盤、前列腺、睪丸蛋白22抗體 0.2ml
50056 C9orf72 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框72抗體 0.2ml
50057 TAS2R7/T2R6 味覺(jué)感受器蛋白T2R6抗體 0.2ml
50058 Annexin I 膜粘連蛋白 I抗體 0.1ml
50059 GPR70/T1R1 蛋白偶聯(lián)受體70抗體 0.2ml
50060 SLC29A4 腦質(zhì)膜單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PMAT抗體 0.1ml
50061 phospho-SLC29A4(Tyr198) 磷酸化腦質(zhì)膜單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PMAT抗體 0.1ml
50062 phospho-Na+/K+-ATPase Alpha1(Ser 943) 磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體 0.2ml
50063 FOXA1/HNF3-alpha 轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體 0.1ml
50064 T2R38/TAS2R38 味覺(jué)感受器蛋白T2R38抗體 0.2ml
50065 PRKD1/PKC mu 蛋白激酶C mu型抗體 0.2ml
50066 FAM81A FAM81A蛋白抗體 0.2ml
50067 phospho-PRKD1(Ser738) 磷酸化蛋白激酶C mu型抗體 0.1ml
50068 Salmonella typhimurium O 傷*體蛋白O抗原抗體 0.2ml
50069 BASP1/Nap22 腦富含膜附著信號(hào)蛋白1抗體 0.2ml
50070 Salmonella enteritidis H 傷*鞭毛抗原H抗體 0.2ml
50071 phospho-PRKD1(Ser742) 磷酸化蛋白激酶C mu型抗體 0.1ml
50072 MMS19 DNA修復(fù)甲基磺酸敏感性基因19抗體 0.2ml
50073 HDL/high density lipoprotein 高密度脂蛋白抗體 0.1ml
50074 KCTD12 鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 0.1ml
50075 BDKRB1 緩激肽B1受體抗體 0.1ml
50076 phospho-PRKD1(Tyr463) 磷酸化蛋白激酶C mu型抗體 0.1ml
50077 IGF2BP1/IMP1 胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
50078 BRMS1 乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體 0.1ml
50079 p53 (FL-393) 腫瘤抑制基因p53抗體 0.2ml
50080 MEPE 細(xì)胞外基質(zhì)磷酸化抗體 0.2ml
50081 IFI44 干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 0.2ml
50082 KCNAB1/Kv beta 1 電壓門控鉀通道蛋白1抗體 0.2ml
50083 Annexin II/Annexin A2 膜粘連蛋白 Ⅱ抗體 0.1ml
50084 PRKD3 蛋白激酶C nu型抗體人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒 0.2ml
50085 phospho-PRKD3(Ser41) 磷酸化蛋白激酶C nu型抗體 0.1ml
50086 SLC30A3/ZNT3 溶質(zhì)載體鋅轉(zhuǎn)運(yùn)3抗體 0.2ml
50087 Viperin/RSAD2 病毒抑制蛋白Viperin抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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