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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-14 17:10:16瀏覽次數(shù):481次
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人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
49752 DHP/Dihydropyrimidinase 二氫嘧啶抗體 0.2ml
49753 DPYD 二氫嘧啶脫氫酶抗體 0.2ml
49754 DPY19L1 短粗矮胖19蛋白樣1抗體 0.2ml
49755 VAV2 癌基因VAV2抗體 0.2ml
49756 DPY19L2 DPY19L2蛋白抗體 0.2ml
49757 DPY19L4 DPY19L4蛋白抗體 0.2ml
49758 DQX1 DQX1蛋白抗體 0.2ml
49759 DPP9/DPRP2 二肽基肽酶9抗體 0.2ml
49760 DPP8/DPRP1 二肽基肽酶8抗體 0.2ml
49761 Matriptase 2 膜型*蛋白酶2抗體 0.2ml
49762 CYBR1 細(xì)胞色素B還原酶1抗體 0.2ml
49763 UQCRC1 輔酶*還原酶核心蛋白1抗體 0.2ml
49764 TXNRD1 硫氧環(huán)蛋白還原酶1抗體 0.2ml
49765 PRDX2/Peroxiredoxin-SO3 硫氧還蛋白過氧化物酶2 0.2ml
49766 NDUFA9 NDUFA9蛋白抗體 0.2ml
49767 GLT8D2 糖基轉(zhuǎn)移酶GLT8D2抗體 0.2ml
49768 LGI4 含*神經(jīng)膠質(zhì)瘤失活蛋白4抗體 0.1ml
49769 MTGR1 髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
49770 LYL1 淋巴細(xì)胞性白血病相關(guān)序列1抗體 0.2ml
49771 Properdin P因子/備解素抗體 0.1ml
49772 RAB6B RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB6B抗體 0.1ml
49773 ANKRD54 錨蛋白重復(fù)域54抗體 0.2ml
49774 COX4NB COX4NB蛋白抗體 0.2ml
49775 FAM82A1 微管動(dòng)力調(diào)節(jié)蛋白FAM82A抗體 0.2ml
49776 FAM46D/CT112 腫瘤/睪丸抗原112抗體 0.2ml
49777 FAM50B FAM50B蛋白抗體 0.2ml
49778 FAM50C FAM50C蛋白抗體 0.2ml
49779 HDHD1 HDHD1蛋白抗體 0.2ml
49780 HDHD2/IER3IP1 HDHD2蛋白抗體 0.2ml
49781 HDHD3 HDHD3蛋白抗體 0.2ml
49782 HDHD2B/LHPP HDHD2B蛋白抗體 0.2ml
49783 HEATR3 HEATR3蛋白抗體 0.2ml
49784 HEATR6 乳腺癌增強(qiáng)蛋白抗體 0.2ml
49785 Proteasome 19S S5A 26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型S5a抗體 0.2ml
49786 Headpin/SERPINB13 *蛋白酶抑制劑13抗體 0.2ml
49787 SESN1/PA26 p53調(diào)控PA26核蛋白抗體 0.2ml
49788 SESN2/Hi95 缺氧誘導(dǎo)基因95抗體 0.2ml
49789 SLU7 SLU7蛋白抗體 0.2ml
49790 SMEK2/PP4R3B */*蛋白磷酸酶3B抗體 0.2ml
49791 SRXN1 硫氧還蛋白1抗體 0.2ml
49792 STK25/YSK1 */*激酶25抗體 0.2ml
49793 PLCZ1 磷酸肌醇磷脂酶PLCZ1抗體 0.1ml
49794 PLDL1/PLCE 磷脂酶C1樣蛋白抗體 0.2ml
49795 CPXCR1 腫瘤/睪丸抗原77抗體 0.2ml
49796 PLTP 磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 0.1ml
49797 TM9SF4 跨膜蛋白9家族成員4抗體 0.2ml
49798 RDH13 *脫氫酶13抗體 0.2ml
49799 NIMP/RTN4IP1 NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體 0.2ml
49800 TMEM173 跨膜蛋白173抗體 0.2ml
49801 TMEM147 跨膜蛋白147抗體 0.2ml
49802 PANK1 泛酸激酶1抗體 0.2ml
49803 PANK2 泛酸激酶2抗體 0.2ml
49804 PANK3 人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒泛酸激酶3抗體 0.2ml
49805 PANK4 泛酸激酶4抗體 0.2ml
49806 CPXM 羧肽酶X(M14家族1)抗體 0.2ml
49807 CPXM2 羧肽酶X(M14家族2)抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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