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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-15 00:42:07瀏覽次數(shù):148次
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人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
49587 CCDC54/NYD-SP17 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白54抗體 0.2ml
49588 Ankyrin G 錨定蛋白G抗體 0.2ml
49589 CCDC61 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白61抗體 0.2ml
49590 CCDC63 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白63抗體 0.2ml
49591 CCDC8 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 0.2ml
49592 CCDC83 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體 0.2ml
49593 CCDC87 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白87抗體 0.2ml
49594 ANP 心鈉素抗體 0.1ml
49595 CCDC88B/BRLZ/HkRP3 大腦*拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.2ml
49596 CCDC92 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體 0.2ml
49597 CCDC93 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體 0.2ml
49598 CCDC96 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96抗體 0.2ml
49599 CHCHD5 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD5抗體 0.2ml
49600 CHCHD6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體 0.2ml
49601 CHCHD8 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8抗體 0.2ml
49602 Slc22a5 溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體 0.2ml
49603 NPFF/FMRFamide *痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF抗體 0.2ml
49604 FAM36A FAM36A蛋白抗體 0.2ml
49605 FAM50A FAM50A蛋白抗體 0.2ml
49606 FAM134C FAM134C蛋白抗體 0.2ml
49607 Histone H2A.Z/ H2AFZ 組蛋白H2AZ抗體 0.2ml
49608 GM130 高爾基體自身蛋白GM130抗體 0.2ml
49609 FBRSL1 乙型肝炎病毒X蛋白反轉(zhuǎn)錄蛋白9抗體 0.2ml
49610 GMRP1/BTBD10 糖代謝相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
49611 BTBD1/HCV NS5A transactivated protein 8 丙肝病毒NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體 0.2ml
49612 BTBD6 BTBD6蛋白抗體 0.2ml
49613 PPO 腺樣癌特異性相關(guān)抗原PPO抗體 0.2ml
49614 G protein alpha G蛋白α抗體 0.2ml
49615 G protein beta subunit like G蛋白β樣蛋白抗體 0.2ml
49616 CHD3 ATP依賴的解旋酶CHD3抗體 0.2ml
49617 WDR79/TCAB1 端粒酶卡哈爾體蛋白抗體 0.2ml
49618 TBL1Y 轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體 0.2ml
49619 RB1CC1 RB1的誘導(dǎo)卷曲蛋白RB1CC1抗體 0.2ml
49620 COX5A *氧化酶5A抗體 0.2ml
49621 CHCHD6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體 0.2ml
49622 GTF2B 通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體 0.2ml
49623 CBX1/HP1 β 異染色體同源蛋白1抗體 0.2ml
49624 KMT3B/NSD1/ARA267 組蛋白甲基化KMT3B抗體(雄激素受體激活蛋白) 0.2ml
49625 NFIC 核因子1C型抗體 0.2ml
49626 IKAROS 鋅指蛋白IKAROS抗體 0.2ml
49627 Dbx2 大腦發(fā)育同源蛋白2抗體 0.2ml
49628 HLX1 同源異型盒基因HLX1蛋白抗體 0.2ml
49629 GTF2H1 通用轉(zhuǎn)錄因子2H肽1抗體 0.2ml
49630 PHF8 組蛋白賴氨酸去甲基化酶PHF8抗體 0.2ml
49631 KIF11/Eg5/TRIP5 驅(qū)動蛋白樣蛋白1抗體(甲狀腺激素受體相互作用蛋白5) 0.2ml
49632 KDM5C/Jarid1C/SMCX 組蛋白去甲基化Jarid1C抗體 0.2ml
49633 phospho-Eg5(Tyr92) 磷酸化驅(qū)動蛋白樣蛋白1抗體 0.1ml
49634 COMMD9 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 0.2ml
49635 COMMD10 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 0.2ml
49636 COMMD8 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體 0.2ml
49637 COMMD3 人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml
49638 COMTD1/AVSD2 富含半*與表皮生長因子樣蛋白2抗體 0.2ml
49639 CRELD2 富含半*與表皮生長因子樣蛋白2抗體 0.2ml
49640 CRYZL1 醌氧化還原酶樣蛋白1抗體 0.2ml
49641 CSMD2 CSMD2蛋白抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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