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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-14 17:35:29瀏覽次數(shù):174次
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人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
49474 COBLL1 Cordon bleu蛋白樣1抗體 0.2ml
49475 COLEC11 凝集蛋白家族11抗體 0.2ml
49476 COLEC10(liver) 凝集蛋白家族10抗體(肝) 0.2ml
49477 COMMD1/MURR1 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
49478 GABARAPL1 γ氨基丁酸受體相關(guān)蛋白樣1抗體 0.2ml
49479 beta-Amyloid(31-35) β淀粉樣肽(31-35)抗體 0.1ml
49480 COMMD7 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 0.2ml
49481 COMMD4 COMM結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 0.2ml
49482 OGFOD1 末端多聚腺苷酸1蛋白抗體 0.2ml
49483 GGPS1 法尼基二磷酸合酶1抗體 0.2ml
49484 GNL1 *核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
49485 β-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體 0.1ml
49486 HEATR2/HEAT repeat containing protein 2 HEATR2蛋白抗體 0.2ml
49487 HIAT1 海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體 0.2ml
49488 ENC1/KLHL35 外胚層神經(jīng)皮層蛋白1抗體 0.2ml
49489 beta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽(1-28)抗體 0.1ml
49490 KBTBD10 BTB-kelch蛋白家族10抗體 0.2ml
49491 KBTBD4 BTB-kelch蛋白家族4抗體 0.2ml
49492 beta-Amyloid(25-35) β淀粉樣肽(25-35)抗體 0.1ml
49493 JMJD2A/KDM4A/JHDM3A 組蛋白去甲基化酶JMJ2A抗體 0.2ml
49494 JMJD5 組蛋白去甲基化酶JMJD5抗體 0.2ml
49495 KLHL21 Kelch樣蛋白21抗體 0.2ml
49496 KLHL23 Kelch樣蛋白23抗體 0.2ml
49497 KLHL24 Kelch樣蛋白24抗體 0.2ml
49498 KLHL25 Kelch樣蛋白25抗體 0.2ml
49499 KLHL26 Kelch樣蛋白26抗體 0.2ml
49500 KLHL3 Kelch樣蛋白3抗體 0.2ml
49501 KLHL10 Kelch樣蛋白10抗體 0.2ml
49502 KLHL11 Kelch樣蛋白11抗體 0.2ml
49503 KLHL14 Kelch樣蛋白14抗體 0.2ml
49504 KLHL31 Kelch樣蛋白31抗體 0.2ml
49505 KLHL32 Kelch樣蛋白32抗體 0.2ml
49506 TMEM2L/KIAA1199 跨膜蛋白2樣蛋白抗體 0.2ml
49507 SAMHD1/HDDC1/MOP5 單核細(xì)胞蛋白5抗體 0.2ml
49508 beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)抗體 0.1ml
49509 HDDC3 四磷酸鳥苷水解酶抗體 0.2ml
49510 PLEKHM1 石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 0.2ml
49511 PLEKHM2/SKIP 血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體 0.2ml
49512 PLEKHM3 血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M3抗體 0.2ml
49513 PID1 磷酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
49514 beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽1-40(C端)抗體 0.1ml
49515 SRRM1 */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體 0.2ml
49516 SRRM2 */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體 0.2ml
49517 SRRM3 */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白3抗體 0.2ml
49518 beta-Amyloid 1-40(CT) β淀粉樣肽 1-40(C端)抗體 0.1ml
49519 SRRM4 */*相關(guān)核基質(zhì)蛋白4抗體 0.2ml
49520 ADCK4 ADCK4蛋白抗體 0.2ml
49521 ADCK3/CABC1 伴侶蛋白bc1同源復(fù)合體抗體 0.2ml
49522 AGFG1 艾滋病病毒復(fù)制結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
49523 AGFG2 HIV-1病毒復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
49524 ANKRD1/CARP 心肌錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域1抗體 0.2ml
49525 ARRDC1 人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
49526 ARRDC2 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
49527 ARRDC3 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml
49528 ARRDC4 抑制蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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