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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-09 17:44:51瀏覽次數(shù):139次
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人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
49248 GPIP137 糖磷脂酰肌醇錨定蛋白137抗體 0.2ml
49249 GRASP65 高爾基體外周膜蛋白p65抗體 0.2ml
49250 AMPK beta 2 腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體 0.2ml
49251 HCF-1 宿主細(xì)胞因子1抗體 0.2ml
49252 KIF15 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員15抗體 0.2ml
49253 KIFC1 驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員C1抗體 0.2ml
49254 phospho-AMPK beta 1(Ser108) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體 0.1ml
49255 phospho-PRKAB1(Ser182) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體 0.1ml
49256 AMPK gamma 1 腺苷酸活化蛋白激酶γ1抗體 0.2ml
49257 KLHDC5 kelch樣蛋白5抗體 0.2ml
49258 phospho-C-Myc(Thr358) 磷酸化致癌基因C-Myc抗體 0.1ml
49259 phospho-C-Myc(Thr373) 磷酸化致癌基因C-Myc抗體 0.1ml
49260 KLHL22 Kelch樣蛋白22抗體 0.2ml
49261 KNTC1/Kinetochore 著絲點(diǎn)關(guān)聯(lián)蛋白1抗體 0.2ml
49262 AMPK gamma 3/PRKAG3 腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體 0.2ml
49263 LRRC62 富含*重復(fù)蛋白62抗體 0.2ml
49264 MFAP1 微原纖維膠原相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
49265 MNS1 減數(shù)分裂特異核結(jié)構(gòu)蛋白1抗體 0.2ml
49266 MPP9/MPHOSPH9 有絲分裂細(xì)胞周期蛋白MPP9抗體 0.2ml
49267 NEDD1 神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)蛋白1抗體 0.2ml
49268 NEK1 */*蛋白激酶NEK1抗體 0.2ml
49269 NEK8 */*蛋白激酶NEK8抗體 0.2ml
49270 NSP5 核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體 0.2ml
49271 n-Myc 致癌基因n-Myc抗體 0.1ml
49272 NUBP1 核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
49273 NUBP2 核苷酸結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
49274 NUP37 核孔蛋白Nup37抗體 0.2ml
49275 PARD6B 缺陷性分配同源物β抗體 0.2ml
49276 PELO PELO蛋白抗體 0.2ml
49277 POC5 細(xì)胞中心粒蛋白抗體 0.2ml
49278 POLA2 DNA聚合酶α2抗體 0.2ml
49279 PSF2 PSF2蛋白抗體 0.2ml
49280 PTOP 腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常同源蛋白抗體 0.2ml
49281 RABGAP1 Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗體 0.2ml
49282 RCL/c Myc responsive c-Myc應(yīng)答蛋白抗體 0.2ml
49283 RINT1 胞膜間內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml
49284 RMND1 減數(shù)分裂同源蛋白1抗體 0.2ml
49285 SGTA 小*三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α抗體 0.2ml
49286 SUGT1 SUGT1蛋白抗體 0.2ml
49287 APC6/CDC16 細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 0.2ml
49288 phospho-APC6/CDC16(Ser560) 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 0.1ml
49289 Borealin/CDCA8 細(xì)胞分裂周期蛋白8抗體 0.2ml
49290 Bub3 有絲分裂蛋白BUB3抗體 0.1ml
49291 Dynamitin/DCTN2 動(dòng)力蛋白激活蛋白2抗體 0.2ml
49292 EB2/End binding protein 2 微管相關(guān)末端結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
49293 INSC 有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體 0.2ml
49294 CENPF 有絲分裂著絲粒蛋白F抗體 0.2ml
49295 Mad2L2 有絲分裂阻滯缺陷2樣蛋白2抗體 0.2ml
49296 NUDC 細(xì)胞核分離基因C蛋白抗體 0.2ml
49297 phospho-NUDC(Ser326) 磷酸化細(xì)胞核分離基因C蛋白抗體 0.1ml
49298 NUP160 核孔蛋白NUP160抗體人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒 0.2ml
49299 Ninein/GSK3B interacting protein GSK3B相互作用蛋白抗體 0.2ml
49300 RASSF7 RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 0.2ml
49301 SKA1 紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
49302 SKA2 紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人細(xì)胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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