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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-25 21:30:02瀏覽次數(shù):176次
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人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
48688 IFRD1 干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白1抗體(神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白PC4) 0.2ml
48689 PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體 0.1ml
48690 phospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體 0.1ml
48691 GPR109A/Puma gamma G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體 0.2ml
48692 SCN3B 電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體 0.2ml
48693 TIS11D/ERF2 表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體 0.2ml
48694 xCT/CCBR1 鈣離子通道阻端耐藥蛋白CCBR1抗體 0.2ml
48695 TSSC3 腫瘤抑制轉(zhuǎn)移候選基因3抗體 0.2ml
48696 TTI1 轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白1抗體 0.2ml
48697 WDR61 WD重復(fù)膜蛋白61抗體 0.2ml
48698 RBR2/Rb2 p130 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣蛋白2抗體 0.2ml
48699 BRCC3/BRCC36 乳腺癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體 0.2ml
48700 Casein Kappa/CSN3/COPS3 K-酪蛋白抗體 0.1ml
48701 CXXC5 二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5抗體 0.2ml
48702 DMTF1 周期素D相互作用蛋白1抗體 0.2ml
48703 GMCL1L 生殖細(xì)胞樣蛋白1樣蛋白抗體 0.2ml
48704 KLLN Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體 0.2ml
48705 HFREP1/FGL1 肝細(xì)胞源性纖維蛋白原相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
48706 Fibrinogen gamma chain *γ鏈抗體 0.2ml
48707 Fibrinopeptide B 纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B) 0.2ml
48708 Mitochondrial ribosomal protein L11 線粒體核糖體蛋白L11抗體 0.2ml
48709 STK40 */*蛋白激酶40抗體 0.2ml
48710 BOD1 雙向染色體細(xì)胞分裂蛋白1抗體 0.2ml
48711 phospho-ANAPC1(Ser377) 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體 0.1ml
48712 Agrin 聚集蛋白抗體 0.1ml
48713 CENPT 著絲粒蛋白T抗體 0.2ml
48714 RanGAP1 RAN GTPase酶激活蛋白1抗體 0.2ml
48715 PRC1 胞質(zhì)分裂調(diào)控蛋白1抗體 0.1ml
48716 CDCREL/SEPT5 細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白1 0.2ml
48717 SEPT6 細(xì)胞分化蛋白SEPT6抗體 0.2ml
48718 Septin 8 細(xì)胞分化蛋白SEPT8抗體 0.2ml
48719 CCDC5 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 0.2ml
48720 BMP9 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體 0.2ml
48721 BMPER BMP內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.2ml
48722 Angiotensin II type 1A receptor 血管緊張素Ⅱ1A型受體抗體 0.1ml
48723 Entactin/Nidogen 巢蛋白1抗體 0.2ml
48724 Cyclin M2/CNNM2 周期素M2抗體 0.2ml
48725 FRS2 成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2抗體 0.2ml
48726 FER/TYK3 *蛋白激酶3抗體 0.2ml
48727 AUTS2 孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體(自閉癥相關(guān)蛋白1) 0.2ml
48728 RABX5/Rabex5 G蛋白相關(guān)RABX5抗體 0.2ml
48729 PPAPDC3 磷脂酸磷酸酶2結(jié)構(gòu)域3抗體 0.2ml
48730 CCDC69 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體 0.2ml
48731 CCDC50 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體 0.2ml
48732 CCDC98 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體 0.2ml
48733 CCDC47 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體 0.2ml
48734 CCDC70 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體 0.2ml
48735 CCDC90A 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體 0.2ml
48736 CCDC51 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體 0.2ml
48737 CCDC125 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體 0.2ml
48738 CCDC37 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體 0.2ml
48739 CCDC17 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒 0.2ml
48740 DCTN1/Dynactin 1 動(dòng)力蛋白激活蛋白1抗體 0.1ml
48741 SNF1LK2/SIK2 */*蛋白激酶SIK2抗體 0.2ml
48742 SHARP1/DEC2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DEC2抗體 0.1ml
48743 MICB MHC I類鏈相關(guān)蛋白B 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人腫瘤特異性移植抗原(TSTA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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