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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-20 06:35:20瀏覽次數(shù):347次
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人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
48576 PEF1 調(diào)亡誘導(dǎo)因子家族蛋白PEF1抗體 0.2ml
48577 PHAPI2/APRIL 酸性核磷蛋白32家族B抗體 0.2ml
48578 DRAK1/STK17A */*蛋白激酶17A抗體(DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激酶1) 0.2ml
48579 ERN2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體 0.2ml
48580 A1BG α1B糖蛋白抗體 0.2ml
48581 A1CF/Apo B RNA editing protein 載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體 0.2ml
48582 FASTKD1 Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
48583 FASTKD2 Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 0.2ml
48584 FASTKD5 Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 0.2ml
48585 HIPK3 Fas相互作用蛋白激酶3抗體 0.2ml
48586 MAP3K9 絲裂原活化蛋白激酶3K9抗體 0.2ml
48587 phospho-MAP3K9+MAP3K10(Thr312 + Thr266) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶3K9抗體 0.1ml
48588 TYRO3/MER+SKY 受體*激酶抗體 0.2ml
48589 MLK2/MAP3K10 絲裂原活化蛋白激酶3K10抗體 0.2ml
48590 MST4 */*蛋白激酶MST4抗體 0.2ml
48591 MAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK 絲裂原活化蛋白激酶3K14抗體 0.2ml
48592 Cullin 5/CUL5 血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體 0.2ml
48593 AQP8/Aquaporin 8 水通道蛋白8抗體 0.2ml
48594 SLC26A4 鈉碘單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC26A4抗體 0.1ml
48595 Granzyme K 顆粒酶K抗體 0.2ml
48596 SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein *多糖核心蛋白抗體 0.2ml
48597 14-3-3 zeta/delta 14-3-3 protein ζ/δ抗體 0.1ml
48598 AIFM3 凋亡誘導(dǎo)因子3抗體 0.2ml
48599 APIP/Apaf1 Interacting Protein 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 0.2ml
48600 APPD/LAPF 凋亡誘導(dǎo)蛋白D抗體 0.2ml
48601 ANT-1/ATP carrier protein 1/Adenine Nucleotide Translocase 1 腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.2ml
48602 CHAC1 陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控樣蛋白1抗體 0.2ml
48603 CIDEC 細(xì)胞死亡活化蛋白抗體 0.2ml
48604 CLPTM1L/CRR9 順氯氨鉑耐藥相關(guān)蛋白9抗體 0.2ml
48605 Calpain 12 鈣激活蛋白酶12抗體 0.2ml
48606 Coronin 3 冠蛋白3抗體 0.2ml
48607 Aggrecan1 軟骨蛋白聚糖抗體 0.1ml
48608 phospho-ANAPC1 (Ser355) 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體 0.1ml
48609 DAD1 細(xì)胞死亡防衛(wèi)蛋白1抗體 0.2ml
48610 TCERG1/CA150 轉(zhuǎn)錄延伸調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.1ml
48611 CAB39L 鈣結(jié)合蛋白樣39抗體 0.2ml
48612 Aggrecanase-2/ADAMTS-5 軟骨蛋白聚糖抗體 0.1ml
48613 CAGE1/CT3/CT95 腫瘤/睪丸抗原3抗體 0.2ml
48614 CD66d/CEAM3 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子3抗體 0.2ml
48615 CLUAP1 成簇相關(guān)蛋白1抗體 0.1ml
48616 CTAG1B/Cancer/testis antigen 1B 腫瘤/睪丸抗原1B 0.2ml
48617 CTAG2 腫瘤/睪丸抗原2抗體 0.2ml
48618 CTAGE5 皮膚T細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)抗原5抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原6) 0.2ml
48619 AGPAT1 溶血磷脂?;D(zhuǎn)移酶抗體 0.2ml
48620 EBAG9/RCAS1 腫瘤相關(guān)表面抗原RCAS1抗體 0.2ml
48621 FAM120C 構(gòu)成激活過氧化酶活化增生受體γ樣蛋白2抗體 0.2ml
48622 MUM1/FLJ14868 突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體 0.2ml
48623 FMNL1 成蛋白相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
48624 GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7 腫瘤/睪丸抗原家族4亞型7抗體 0.2ml
48625 JAKMIP2/NECC1 JAK和微管相互作用蛋白2抗體(JAK和微管相互作用蛋白2) 0.2ml
48626 LRRC15 富含*重復(fù)蛋白15抗體 0.2ml
48627 MAGEA10 人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒 黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體 0.2ml
48628 MAGEA11 黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體 0.2ml
48629 MAGEA12 黑色素瘤相關(guān)抗原12抗體 0.2ml
48630 MAGEA2 黑色素瘤相關(guān)抗原2抗體 0.2ml
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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