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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-14 15:52:40瀏覽次數(shù):146次
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人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
47891 CADM 4 細(xì)胞粘附分子4抗體 0.2ml
47892 DAB2IP Dab2相互作用蛋白抗體 0.2ml
47893 DAB2 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能磷蛋白DAB2抗體 0.2ml
47894 ADRB3/beta 3 Adrenergic Receptor β3腎上腺素能受體抗體 0.1ml
47895 DACH1 細(xì)胞命運決定因子DACH1抗體 0.2ml
47896 DRG1 GTP發(fā)育調(diào)控結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
47897 DNAJB4/HSP40 homolog 熱休克蛋白家族40抗體 0.1ml
47898 DAL1/EPB41L3 細(xì)胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗體 0.2ml
47899 MIG6/ERRFI1 有絲分裂原誘導(dǎo)基因6抗體 0.2ml
47900 EXTL 外生性骨疣樣蛋白2抗體 0.2ml
47901 FBXO31 F-box蛋白家族FBXO31抗體 0.2ml
47902 FLCN/BHD/Folliculin 卵巢濾泡激素抗體(BHD綜合征) 0.1ml
47903 GADD45GIP1 GADD45γ相互作用蛋白1抗體 0.2ml
47904 GAS8 生長停滯特異性蛋白8抗體 0.2ml
47905 GTPBP4/CRFG GTP結(jié)合蛋白4抗體(慢性腎功能衰竭蛋白) 0.2ml
47906 HACE1 E3泛素蛋白連接酶HACE1抗體 0.2ml
47907 SMARCA6/HELLS 淋巴特異性解旋酶抗體 0.2ml
47908 SMARCA1/SNF2L 解旋酶SNF2L抗體 0.2ml
47909 ACBD6 ?;?結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml
47910 ACVR1B/ALK4 激活素A受體1B抗體 0.2ml
47911 ACY1/Aminoacylase 1 氨基?;?抗體 0.2ml
47912 ACVRL1/ALK1 激活素受體樣激酶1抗體 0.2ml
47913 ASAH2 酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體 0.2ml
47914 ASAM/ACAM 脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體 0.1ml
47915 CARPX/CA10 碳酸酐酶相關(guān)蛋白抗體(腦蛋白15) 0.1ml
47916 CA12 碳酸酐酶12抗體 0.1ml
47917 IGFR3/CD16 FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體 0.1ml
47918 CD200/MOX1 膜糖蛋白CD200抗體 0.1ml
47919 CD66c/CEACAM6 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子抗體 0.2ml
47920 CPA1/Carboxypeptidase A 胰羧肽酶A1抗體 0.1ml
47921 CPA2/Carboxypeptidase A2 羧肽酶A2抗體 0.1ml
47922 CPB1/Carboxypeptidase B1 胰羧肽酶B1抗體 0.1ml
47923 CPEB1 細(xì)胞質(zhì)多聚腺苷酸結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
47924 Cystatin E/M 半*蛋白酶抑制劑6抗體 0.1ml
47925 CRABP2 細(xì)胞維甲酸結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
47926 CST7/Cystatin F 半*蛋白酶抑制劑7抗體 0.1ml
47927 NBL1/DAND1 神經(jīng)母細(xì)胞瘤抑瘤蛋白1抗體 0.1ml
47928 DLL4/Delta 4 Notch信號通路Delta樣配體4抗體 0.1ml
47929 DPP2 溶酶體*蛋白酶DPP2抗體 0.1ml
47930 FSTL1/FRP 卵泡相關(guān)蛋白1 0.1ml
47931 HPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1 前列腺素脫氫酶1抗體 0.1ml
47932 HPRG/HRG *富含*糖蛋白抗體 0.1ml
47933 Hemopexin/HPX 糖蛋白β-1B抗體 0.1ml
47934 LRPAP1/MRAP 脂蛋白受體相關(guān)蛋白抗體(低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1) 0.1ml
47935 MEP1A/Meprin alpha/PPHA 苯甲酸肽水解酶抗體 0.1ml
47936 METTL11A 甲基化樣蛋白11抗體(N端) 0.1ml
47937 Nicastrin 老年性癡呆蛋白APH2抗體 0.1ml
47938 IGFBP9/CCN3 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白9 0.1ml
47939 PCSK9/NARC1 神經(jīng)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化蛋白1抗體(前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9) 0.1ml
47940 PIGR 多聚免疫球蛋白受體抗體 0.1ml
47941 PRDM2/RIZ1 鋅指蛋白RIZ1抗體 0.1ml
47942 PRMT6 組蛋白*甲基轉(zhuǎn)移酶6抗體 0.1ml
47943 PRSS8 *蛋白酶8抗體 人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒 0.1ml
47944 TCF3/E2A/E47 轉(zhuǎn)錄因子3抗體(螺旋環(huán)螺旋蛋白HE47) 0.2ml
47945 phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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