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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-31 22:35:42瀏覽次數(shù):152次
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人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
47723 AEG-1/LYRIC AEG-1抗體 0.2ml
47724 AMH/MIS Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 0.2ml
47725 Glutaminase *酶抗體 0.2ml
47726 Visfatin-1(CT) 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體) 0.1ml
47727 Tissue factor/CD142/F3 組織因子抗體 0.1ml
47728 Galc 半乳糖腦苷脂酶抗體 0.1ml
47729 AEV polyprotein 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體 0.1ml
47730 EBNA 3B EB病毒核抗原-3B抗體 0.2ml
47731 ADFP 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
47732 LMP2A EB病毒LMP-2A蛋白抗體 0.2ml
47733 ADAM2 去整合素樣金屬蛋白酶2抗體 0.2ml
47734 MLCK 肌球蛋白輕鏈激酶抗體 0.1ml
47735 Acetyl-Histone H4(K5) 乙?;M蛋白H4抗體 0.1ml
47736 Acetyl-Histone H4(K16) 乙?;M蛋白H4(K16)抗體 0.1ml
47737 AFP 甲胎蛋白抗體 0.1ml
47738 AEV(Avian Encephalomyelitis virus) 禽腦脊髓炎病毒AEV抗體 0.1ml
47739 ADAM17/CD156b 腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶 0.1ml
47740 PGT/Slco2a1 溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體 0.2ml
47741 ADAM10/MADM/CD156c 去整合素樣金屬蛋白酶10抗體 0.2ml
47742 Salmonella 沙門氏菌抗體(多型) 0.2ml
47743 ADAM11 去整合素樣金屬蛋白酶11抗體 0.2ml
47744 Histone H3 (Tri Methyl K4) *基化組蛋白H3抗體 0.1ml
47745 MAGEA11 黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體 0.2ml
47746 ADAMTS12 整合素樣金屬蛋白酶與*1型-12抗體 0.2ml
47747 ADH/AVP 抗利尿激素/血管升壓素抗體(和肽素) 0.1ml
47748 GDF9 生長分化因子9抗體 0.1ml
47749 ADAM8 去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 0.2ml
47750 NT-3 神經(jīng)營養(yǎng)因子3抗體 0.1ml
47751 ADAM9 去整合素樣金屬蛋白酶9抗體 0.2ml
47752 ABHD5 自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體 0.2ml
47753 MRC1/CD206 巨噬細胞甘露糖受體抗體 0.2ml
47754 Bone Sialoprotein/BSP 骨涎蛋白 0.1ml
47755 NOX4/NADPH oxidase 4 NADPH氧化酶4抗體 0.1ml
47756 ABP1 植物生長激素ABP1抗體 1ml
47757 Podoplanin Protein/gp36 平足蛋白抗體(淋巴管內(nèi)皮細胞蛋白) 0.1ml
47758 Cathelicidin 抗菌肽CAMP抗體 0.1ml
47759 CD168/RHAMM 透明質(zhì)酸介導細胞游走受體抗體 0.2ml
47760 polyprotein[Classical swine fever virus, CSFV] 抗豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍耳病病毒抗體 0.2ml
47761 CSFV/Classical swine fever virus 豬瘟病毒抗體 0.2ml
47762 CSFV/Classical swine fever virus 豬瘟病毒抗體 0.2ml
47763 Integrin beta 6 整合素β6抗體(Integrin β6) 0.2ml
47764 IFITM1/CD225 干擾素誘導跨膜蛋白1抗體 0.1ml
47765 CSFV/Classical swine fever virus 豬瘟病毒抗體 0.2ml
47766 NAPSIN A/ASP4 天冬氨酸蛋白酶ASP4抗體 0.2ml
47767 CD19 CD19抗體 0.1ml
47768 Nucleophosmin 核仁磷酸蛋白抗體 0.2ml
47769 CK15 細胞角蛋白15抗體 0.1ml
47770 CA153/EMA/Mucin-1 subunit alpha 乳腺癌相關(guān)抗原抗體 0.1ml
47771 GRM2/GLUR2 促代謝型*受體2抗體 0.1ml
47772 CD133 造血干細胞抗原CD133抗體 0.1ml
47773 Mucin 4/Muc4 粘蛋白-4抗體 0.1ml
47774 BKCA alpha 鈣激活鉀通道蛋白α抗體 0.2ml
47775 HSPB2 熱休克蛋白B2抗體人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒 0.1ml
47776 phospho-CD19(Ser227) 磷酸化CD19抗體 0.1ml
47777 CD8 CD8抗體 0.1ml
47778 CD8 alpha CD8抗體 0.1ml
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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