人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

46084 Biotin/BSA  *偶聯(lián)牛血清白蛋白  2mg
46085 ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39)  促腎上腺皮質(zhì)激素（18-39）(抗原)  0.5mg
46086 SP (Substance P)  P物質(zhì)（抗原）  0.5mg
46087 Ghrelin  腦腸肽(一種新的生長(zhǎng)激素釋放肽)多肽抗原  0.5mg
46088 Gastrin(human)peptide(1-17)  胃泌素/蛙皮素（多肽人源）  0.5mg
46089 myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP)  外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原  0.5mg
46090 Insulin protein (from porcine pancreas)  豬胰島素  0.5mg
46091 bovine Insulin protein   牛胰島素蛋白  10mg
46092 Tachyplesin I(Tachyplesin-1 precursor )  抗菌肽  0.5mg
46093 TRH (Thyrotropin releasing hormone )  促甲狀腺素釋放激素  10mg
46094 PAR-2 AP (Protease-activated receptors-2 Activating polypeptide)  蛋白酶激活受體-2激活肽  0.5mg
46095 Cygb (cytoglobin)  細(xì)胞球蛋白抗原  0.5mg
46096 PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide)  蛋白酶激活受體-2桔抗肽  0.5mg
46097 DLX4 (Dsital-less homebox4 isoformAlpha/ Beta)  末梢同源匡基因多肽片段  0.5mg
46098 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)  ?？窠?jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46099 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Ala22)  ?？窠?jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46100 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22)  ?？窠?jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46101 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22)  ?？窠?jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46102 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9)  ?？窠?jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46103 ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11)  海葵神經(jīng)毒素（35肽）  0.1mg
46104 rHBcAg  重組乙肝病毒核心抗原  100ug
46105 rHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein)  重組乙肝病毒e抗原  100ug
46106 rDen(rh-Dengue Virus)  多價(jià)重組人登革熱病毒診斷抗原  100ug
46107 rDen-2(rh-Dengue Virus)  重組人登革熱病毒2型診斷抗原  100ug
46108 rSLT/SLT-IIe(O139)  重組豬水腫素蛋白  0.2mg
46109 ADM (Adrenomedullin)(22-52)  腎上腺髓質(zhì)素（22-52）  0.1mg
46110 ADM (Adrenomedullin)(22-42)  腎上腺髓質(zhì)素（22-42）  0.5mg
46111 AAT(Alpha-1Anti-tiypsin)  α-1抗*(抗原）  0.5mg
46112 FPP(Fertilization Promoting Peptide)  受精促進(jìn)肽  10mg
46113 ACEI (Angiotensin I Converting Enzyme Inhibitor )  血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑(抗原）  0.5mg
46114 Acinus peptide  ACINUS 多肽抗原  0.5mg
46115 T4-BSA  甲狀腺素T4偶聯(lián)牛血清白蛋白  1mg
46116 mouse IgA  小鼠IgA  1mg
46117 ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(7-23)  促腎上腺皮質(zhì)激素（7-23）(抗原）  0.2mg
46118 Insulin (from porcine pancreas)  胰島素  1mg
46119 Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta)  肌動(dòng)蛋白(抗原）  0.5mg
46120 rHBsAg   重組乙肝病毒表面抗原  100ug
46121 AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1)  脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1  0.5mg
46122 Melamine/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記三聚氰胺  0.5ml
46123 SP-B peptide  肺表面活性蛋白B抗原  0.5mg
46124 DCP peptide  異常*原/脫-γ-羧基*原抗原  0.5mg
46125 MMP-9(matrix metalloproteinase 9)  基質(zhì)金屬蛋白酶-9(抗原)  0.5mg
46126 AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor)  晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體(抗原）  0.5mg
46127 14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原）  0.5mg
46128 14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris))  植物14-3-3蛋白抗原  0.5mg
46129 FRA1/FOSL1 peptide   FRA-1多肽蛋白  1mg
46130 AIF　(Apoptosis-Inducing Factor)  調(diào)亡誘導(dǎo)因子(多肽片斷抗原）  0.5mg
46131 Adenylate Kinase 1 (AK-1)  腺苷酸激酶-1  0.5mg
46132 Akt/PKB  蛋白激酶B（抗原）  0.5mg
46133 2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid)  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白  5mg
46134 2,4-D/BSA  2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白  1mg
46135 CA153/MUC1/KL-6 peptide 人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒 乳腺癌相關(guān)抗原  0.5mg
46136 ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase)(CD246Ag)  間變型淋巴瘤激酶（抗原）  0.5mg
46137 5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP)  5-羥色胺  20mg
46138 AM (Adrenomedullin; ADM)  腎上腺髓質(zhì)素（多肽抗原）  0.1mg

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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