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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
44304 乙二胺四乙酸鈣二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Edetate Calcium Disodium 200mg 23411-34-9
44305 乙二胺四乙酸二鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Edetate Disodium 200mg 6381-92-6
44306 乙二胺四乙酸標(biāo)準(zhǔn)品 Edetic Acid 200mg 60-00-4
44307 依酚氯銨標(biāo)準(zhǔn)品 Edrophonium Chloride 200mg 116-38-1
44308 依法韋侖標(biāo)準(zhǔn)品 Efavirenz 200mg 154598-52-4
44309 外消旋依法韋侖標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 177530-93-7
44310 依法韋侖相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 209414-27-7
44311 依法韋侖相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 391860-73-4
44312 依法韋侖相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 cards 440124-96-9
44313 二十烷五烯酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品 500mg 86227-47-6
44314 紫*甙標(biāo)準(zhǔn)品 Eleutheroside B 15mg 118-34-3
44315 刺五加甙E標(biāo)準(zhǔn)品 Eleutheroside E 15mg 96038-87-8
44316 刺五加粉末提取物標(biāo)準(zhǔn)品 Powdered Eleuthero Extract 1.5g 84696-12-5
44317 *標(biāo)準(zhǔn)品 Emedastine Difumarate 100mg 87233-62-3
44318 *標(biāo)準(zhǔn)品 Emtricitabine 200mg 143491-57-0
44319 *系統(tǒng)適用性混合物A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
44320 *系統(tǒng)適用性混合物B標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
44321 *標(biāo)準(zhǔn)品 Enalapril Maleate 200mg 76095-16-4
44322 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品 ea
44323 *標(biāo)準(zhǔn)品 Enflurane 1ml 13838-16-9
44324 肝素標(biāo)準(zhǔn)品 300mg 9041/8/1
44325 依諾*溶液用于生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品 1ml NA
44326 依諾*分子量校準(zhǔn)B標(biāo)準(zhǔn)品 6mg
44327 *標(biāo)準(zhǔn)品 Enrofloxacin 200mg 93106-60-6
44328 *相關(guān)物質(zhì)合劑標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
44329 恩他卡朋標(biāo)準(zhǔn)品 Entacapone 150mg 130929-57-6
44330 恩他卡朋相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Entacapone Related Compound A 25mg 145195-63-7
44331 4-差向脫水四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 4465-65-0
44332 (-)-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 989-51-5
44333 表乳酸標(biāo)準(zhǔn)品 Epilactose 200mg 50468-56-9
44334 酒石酸腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品 Epinephrine Bitartrate 200mg 51-42-3
44335 差向四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 23313-80-6
44336 依普菌素標(biāo)準(zhǔn)品 300mg
44337 氟哌噻噸標(biāo)準(zhǔn)品 Equilin 25mg 474-86-2
44338 骨化醇標(biāo)準(zhǔn)品 Ergocalciferol (Vitamin D2) 30mg×5ampules 50-14-6
44339 甲磺酸雙氫麥角堿標(biāo)準(zhǔn)品 Ergoloid Mesylates 300mg 8067-24-1
44340 馬來(lái)酸*標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 129-51-1
44341 麥角固醇標(biāo)準(zhǔn)品 Ergosterol 50mg 57-87-4
44342 酒石酸麥角胺標(biāo)準(zhǔn)品 150mg 379-79-3
44343 麥角異胺標(biāo)準(zhǔn)品 Ergotaminine (List Chemical) 100mg 639-81-6
44344 異抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品 Erythorbic Acid 50mg 89-65-6
44345 赤蘚糖醇標(biāo)準(zhǔn)品 Erythritol 200mg 149-32-6
44346 *標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin 250mg 114-07-8
44347 *B標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin B 100mg 527-75-3
44348 *C標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin C 50mg 1675-02-1
44349 *相關(guān)物質(zhì)N標(biāo)準(zhǔn)品 人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒50mg 992-62-1
44350 依托*標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin Estolate 200mg 3521-62-8
44351 琥乙*標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin Ethylsuccinate 200mg 1264-62-6
44352 葡庚糖酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin Gluceptate 200mg 23067-13-2
44353 乳糖酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Erythromycin Lactobionate 200mg 3847-29-8
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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