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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-19 10:17:53瀏覽次數(shù):153次
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人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
44096 *相關物質(zhì)D標準品 25mg 158401-51-5
44097 2-環(huán)丙甲基氨基-5-氯二苯甲酮標準品 50mg
44098 環(huán)*標準品 Cycloserine 250mg 68-41-7
44099 環(huán)孢菌素標準品 Cyclosporine 50mg 59865-13-3
44100 環(huán)孢菌素分離度用混合物標準品 25mg
44101 莰烯*標準品 Cyclothiazide (AS) 200mg 2259-96-3
44102 *標準品 Cyproheptadine Hydrochloride 500mg 41354-29-4
44103 賽庚啶相關物質(zhì)A標準品 40mg 256-81-5
44104 環(huán)丙氨嗪標準品 Cyromazine 200mg 66215-27-8
44105 L-半*鹽酸鹽標準品 L-Cysteine Hydrochloride 200mg 7048/4/6
44106 L-*標準品 Cystine 200mg 56-89-3
44107 阿糖胞苷標準品 Cytarabine 250mg 147-94-4
44108 5-胞苷酸標準品 5-Cytidylic Acid 500mg 63-37-6
44109 胞嘧啶標準品 Cytosine 100mg 71-30-7
44110 *標準品 Dacarbazine 125mg 4342/3/4
44111 *相關物質(zhì)A標準品 50mg 72-40-2
44112 *相關物質(zhì)B標準品 50mg 4656-86-4
44113 *標準品 Dactinomycin 50mg 50-76-0
44114 大豆素標準品 Daidzein 25mg 486-66-8
44115 豆苷標準品 Daidzin 30mg 552-66-9
44116 *標準品 Danazol 200mg 17230-88-5
44117 丹曲林標準品 Dantrolene 200mg 7261-97-4
44118 丹曲林鈉標準品 Dantrolene Sodium 100mg 24868-20-0
44119 丹曲林相關物質(zhì)A標準品 50mg 301359-05-7
44120 丹曲林相關物質(zhì)B標準品 50mg 57268-33-4
44121 丹曲林相關物質(zhì)C標準品 50mg 7147-77-5
44122 4,4'-二氨基二苯砜標準品 Dapsone 125mg 80-08-0
44123 鹽酸柔*標準品 Daunorubicin Hydrochloride 200mg 23541-50-6
44124 溴化十烴季胺標準品 Decamethonium Bromide 250mg 541-22-0
44125 癸氧喹酯標準品 Decoquinate 200mg 18507-89-6
44126 去鐵銨標準品 Deferoxamine Mesylate 500mg 138-14-7
44127 脫氫乙酸標準品(酮式) Dehydroacetic Acid 200mg 520-45-6
44128 鹽酸脫氫卡替洛爾標準品 Dehydrocarteolol Hydrochloride 100mg
44129 *標準品 Dehydrocholic Acid 200mg 81-23-2
44130 地美溴銨標準品 Demecarium Bromide 250mg 56-94-0
44131 鹽酸*標準品 200mg 64-73-3
44132 苯甲地那銨標準品 Denatonium Benzoate 200mg 86398-53-0
44133 脫氧升麻烴標準品 23-EPI-26-Deoxyactein 20mg 264624-38-6
44134 D-2-脫氧葡萄糖標準品 2-Deoxy-D-Glucose (AS) 100mg 154-17-6
44135 鹽酸去乙酰地爾硫卓標準品 50mg 23515-45-9
44136 *標準品 Desflurane 0.5ml 57041-67-5
44137 *相關物質(zhì)A標準品 0.1ml 67429-44-1
44138 鹽酸去甲咪嗪標準品 Desipramine Hydrochloride 125mg 58-28-6
44139 *丙標準品 Deslanoside 100mg 17598-65-1
44140 脫甲氧基姜黃素標準品 Desmethoxycurcumin 30mg 24939-17-1
44141 醋酸*標準品人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒 1.91mg 62357-86-2
44142 去氧孕烯標準品 Desogestrel 50mg 54024-22-5
44143 去氧孕烯相關物質(zhì)A標準品 15mg
44144 去氧孕烯相關物質(zhì)B標準品 15mg 70805-85-5
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人細胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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