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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
42279 太子參環(huán)肽B 供含量測(cè)定用 常溫,避光 20mg 111887-201001
42280 對(duì)羥基苯乙酮 供含量測(cè)定 常溫,避光 20mg 111897-201001
42281 芫花素(暫行) 供含量測(cè)定 常溫,避光 20mg 111899-201001
42282 橙黃決明素(暫行) 供含量測(cè)定用 常溫,避光 20mg 111900-201001
42283 山麥冬皂苷B 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111907-201001
42284 短亭山麥冬皂苷C 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111908-201001
42285 魯斯可皂苷 常溫,避光 111909-201001
42286 木通苯乙醇苷B 含量測(cè)定 -20℃,避光 20mg 111910-201001
42287 荷苞花苷 含量測(cè)定 -20℃,避光 20mg 111910-201001
42288 *苷H 供含量 常溫,避光 10mg 111913-201001
42289 4-羥基苯乙酸 供含量測(cè)定 常溫,避光 20mg 111916-201001
42290 女貞苷 供含量測(cè)定 常溫,避光 10mg 111918-201001
42291 瓜子金皂苷己 供含量測(cè)定 常溫,避光 20mg 111921-201001
42292 乙酰哈巴苷 供含量測(cè)定 常溫,避光 20mg 111925-201001
42293 醋酸* 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100001-200504
42294 * 含量測(cè)定 常溫,避光 500mg 100002-200605
42295 (+)2-氨基丁醇 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100003-200703
42296 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100004-200603
42297 苯丁酸氮芥 含量測(cè)定 常溫,避光 50mg 100005-199402
42298 苯甲酸雌二醇 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100006-200504
42299 芐氟噻嗪 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100007-200703
42300 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100008- 200505
42301 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100009-200704
42302 醋酸氟氫松 含量測(cè)定 常溫,避光 50mg 100010-200507
42303 * 鑒別 常溫,避光 50mg 100011-198501
42304 醋酸* 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100012-200706
42305 *磷酸鈉 TCL法檢查 常溫,避光 100mg 100016-201015
42306 對(duì)氨基苯甲酸 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100017-200509
42307 * 含量測(cè)定 常溫,避光 1000mg 100018-200408
42308 鹽酸咪唑雜質(zhì) 檢查用 常溫,避光 30mg 100020-200604
42309 * 鑒別用 常溫,避光 100mg 100021-200503
42310 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100022-200403
42311 甘羅溴銨 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg
42312 * 鑒別 常溫,避光 50mg 100023-198601
42313 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100025-200904
42314 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100026-200903
42315 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100028-199907
42316 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100030-200504
42317 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100031-200304
42318 * 常溫,避光 50mg 100032-
42319 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100033-200607
42320 枸櫞酸氯米芬 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 010034-200503
42321 甲磺酸雙氫麥角毒堿 常溫,避光 50mg
42322 * 含量測(cè)定 常溫,避光 50mg 100037-200306
42323 鄰甲苯磺酰胺 檢查用 常溫,避光 100mg 100038-200803
42324 6-巰基嘌呤 檢查用 常溫,避光 100mg 100039-200602
42325 2-氯-4-硝基苯胺 檢查用 常溫,避光 50mg 100042-200002
42326 * 檢查用 常溫,避光 50mg 100043-199701
42327 馬來(lái)酸* 常溫,避光 50mg
42328 咪唑 檢查用 常溫,避光 50mg 100045-199903
42329 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100046-200504
42330 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100047- 200606
42331 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100048- 200902
42332 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100050- 200802
42333 * HPLC法含量測(cè)定 常溫,避光 50mg 100052- 200308
42334 * 含量測(cè)定 常溫,避光 100mg 100053- 200705
42335 4-N-去甲基* 檢查用 常溫,避光 500mg 100054-9503
42336 * 含量測(cè)定 常溫,避光 人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒50mg 100055-200302
42337 * 含量測(cè)定 常溫,避光 1000mg 100057-200601
42338 乳糖 含量測(cè)定 常溫,避光 200mg 100058-200902
42339 美法侖 檢查用 常溫,避光 100mg 100059-200702
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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