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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-18 07:19:27瀏覽次數(shù):271次
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人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
42217 菊苣酸 含量測定 常溫,避光 20mg 111752-200601
42218 羅漢果苷Ⅴ 含量測定 常溫,避光 20mg 111754-200601
42219 20(S)-原人參三醇 含量測定 常溫,避光 20mg 111755-200601
42220 二苯基庚烷A 含量測定 常溫,避光 20mg 111757-200601
42221 11-羰基-β-乙酰乳香酸 含量測定 常溫,避光 20mg 111760-200601
42222 桃葉珊瑚苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111761-200601
42223 銀杏酸C15:1 含量測定 常溫,避光 20mg 111762-200601
42224 20(S)-人參皂苷F1 含量測定 常溫,避光 20mg 111763-200601
42225 20(S)-人參皂苷F2 含量測定 常溫,避光 20mg 111764-200601
42226 5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮 含量測定 常溫,避光 20mg 111765-200601
42227 金橙Ⅱ 檢查 常溫,避光 20mg 111769-200701
42228 金胺O 檢查 常溫,避光 20mg 111770-200701
42229 胭脂紅 檢查 常溫,避光 20mg 111771-200701
42230 赤蘚紅 檢查 常溫,避光 20mg 111772-200701
42231 酸性紅73 檢查 常溫,避光 20mg 111773-200701
42232 月桂酸 含量測定 常溫,避光 20mg 111774-200701
42233 匙羹藤皂苷C 檢查 常溫,避光 20mg 111776-200701
42234 異長春花苷內(nèi)酰胺 含量測定 2-8℃,避光 20mg 111778-200801
42235 20(S)-人參皂苷Rg2 鑒別 常溫,避光 20mg 111779-200801
42236 衛(wèi)矛醇 鑒別 常溫,避光 20mg 111781-200901
42237 3,5-O二咖啡?;鼘幩?含量測定 常溫,避光 20mg 111782-200801
42238 *隨行對(duì)照品(暫行) 指紋圖譜 常溫,避光 650mg 111783-200801
42239 去乙酰車葉草酸甲酯 含量測定 常溫,避光 20mg 111786-200801
42240 7,4'-二羥基黃酮 含量測定 常溫,避光 20mg 111787-200801
42241 香葉木素 含量測定 常溫,避光 20mg 111788-200801
42242 4'-去甲基* 含量測定 常溫,避光 20mg 111792-200901
42243 杜柳毒苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111793-200901
42244 杯莧甾酮(暫行) 含量測定 常溫,避光 20mg 111804-201001
42245 莰烯 供鑒別用 2-8℃,密封 40mg 111805-201001
42246 相思子堿 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111808-201001
42247 柳穿魚黃素 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111815-201001
42248 苦蒿素 供含量測定 常溫,避光 20mg 111817-201001
42249 羌活醇 含量測定 2-8℃,避光 20mg 111820-201001
42250 紫花前胡苷 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111821-201001
42251 廣藿香酮 鑒別 2-8℃,避光 20mg 111822-201001
42252 喬松素 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111829-201001
42253 榿木酮 含量測定 2-8℃,密封 20mg 111830-201001
42254 酸漿苦味素L 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111831-201001
42255 苷松新酮 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111832-201001
42256 6-姜辣素 供含量測定用 常溫,避光 0.2ml 111833-201001
42257 1-甲基海因 供鑒別 常溫,避光 20mg 111836-201001
42258 安五脂素 供鑒別用 常溫,避光 20mg 111844-201001
42259 23-乙酰澤瀉醇B 含量測定 -20℃,避光 20mg 111846-201001
42260 3,6-二芥子?;崽?供含量測定 常溫,避光 20mg 111848-201001
42261 遠(yuǎn)志口山酮 供含量測定 常溫,避光 20mg 111850-201001
42262 寶藿苷Ⅰ 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111852-201001
42263 王不留行黃酮苷 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111853-201001
42264 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111854-201001
42265 偽原*(暫行) 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111855-201001
42266 絡(luò)石苷 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111858-201001
42267 α-松油醇(暫行) 鑒別 2-8℃,避光 0.1ml 111859-201001
42268 竹節(jié)參皂苷ⅠVa(暫行) 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111861-201001
42269 三百草酮 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111863-201001
42270 櫟癭酸 鑒別 常溫,避光 20mg 111864-201001
42271 大戟二烯醇 含量測定 4℃,避光 20mg 111866-201001
42272 長梗冬青苷 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111868-201001
42273 8-0-乙酰山梔苷甲酯 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111872-201001
42274 洋艾素 供含量測定用 常溫,避光 人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒20mg 111879-201001
42275 α-常春藤皂苷 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111880-201001
42276 款冬酮 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111884-201001
42277 蟛蜞菊內(nèi)脂 供含量測定用 常溫,避光 20mg 111885-201001
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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