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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-05 03:32:01瀏覽次數(shù):226次
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人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
42154 柯里拉京 含量測定 常溫,避光 20mg 111623-200301
42155 α-亞麻酸甲酯 含量測定 -20℃,避光 0.2ml 111624-200602
42156 *甲酯 含量測定 -20℃,避光 0.2ml 111625-200502
42157 沙棘油 鑒別 常溫,避光 0.2ml 111627-200301
42158 糠酸 鑒別 常溫,避光 20mg 111630-200301
42159 α-亞麻酸 含量測定 -20℃,避光 0.2ml 111631-200502
42160 射干苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111632-200501
42161 正十八烷 含量測定 常溫,避光 0.2ml 111636-200402
42162 蛻皮甾酮 含量測定 常溫,避光 10mg 111638-200402
42163 正己酸 鑒別 常溫,避光 0.2ml 111641-200301
42164 甲基* 含量測定 常溫,避光 0.2ml 111642-200301
42165 香葉醇 含量測定 常溫,避光 0.2ml 111643-200301
42166 D-半乳糖醛酸 UV法含量測定 常溫,避光 50mg 111646-200301
42167 千金藤素 含量測定 常溫,避光 20mg 111647-200301
42168 異* 鑒別 常溫,避光 20mg 11649-
42169 苯甲醛 含量測定 常溫,避光 0.5ml 111650-200802
42170 卡維丁 含量測定 常溫,避光 20mg 111651-200301
42171 5-羥色胺鹽酸鹽 含量測定 常溫,避光 20mg 111656-200401
42172 烈香杜鵑油 鑒別 常溫,避光 0.2ml 111657-200301
42173 * 鑒別 常溫,避光 0.2ml 111658-200301
42174 * 鑒別 常溫,避光 30mg 111659-
42175 龍血素A 含量測定 常溫,避光 20mg 111660-200402
42176 木栓酮 鑒別 常溫,避光 10mg 111663-200401
42177 牻牛兒酮 含量測定 常溫,避光 20mg 111665-200902
42178 二氫辣椒素 含量測定 常溫,避光 20mg 111666-200401
42179 脫水卡維丁 含量測定 常溫,避光 20mg 111667-200401
42180 老龍皮酸 常溫,避光 10mg 111669-
42181 網(wǎng)脊衣酸 常溫,避光 10mg 111669-
42182 醋酸辛酯 含量測定 常溫,避光 0.5ml 111671-200602
42183 焦性沒食子酸 含量測定 常溫,避光 100mg 111672-200401
42184 萘 含量測定 常溫,避光 100mg 111673-200803
42185 環(huán)己酮 含量測定 常溫,避光 0.2ml 111674-200401
42186 正十五烷 內(nèi)標 常溫,避光 0.2ml 111677-200401
42187 *乙酯 含量測定 常溫,避光 50mg 111678-200401
42188 檸檬酸 含量測定 常溫,避光 100mg 111679-200401
42189 對二氯苯 含量測定 常溫,避光 100mg 111682-200401
42190 氫溴酸檳榔堿 含量測定 常溫,避光 50mg 111684-200401
42191 川續(xù)斷皂苷Ⅵ 含量測定 常溫,避光 20mg 111685-200802
42192 牡荊苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111687-200602
42193 天然* 含量測定 常溫,避光 50mg 111688-200501
42194 右旋龍腦 含量測定 常溫,避光 50mg 111688-200501
42195 β,β-二甲基丙烯酰阿卡寧 含量測定 常溫,避光 20mg 111689-200502
42196 白果新酸 檢查 常溫,避光 20mg 111690-200702
42197 甘油三油酸酯 含量測定 -20℃,避光 0.15ml 111692-200501
42198 甘油三*酯 含量測定 2-8℃,避光 0.15ml 111693-201002
42199 十七碳酸甲酯 含量測定 常溫,避光 20mg 111694-200501
42200 槐角苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111695-200501
42201 芒柄花素 鑒別 常溫,避光 20mg 111703-200602
42202 (-)-薄荷酮 GC法含量測定 常溫,避光 0.2ml 111705-200602
42203 胡薄荷酮 含量測定 常溫,避光 0.2ml 111706-201004
42204 1,5-O-二咖啡??鼘幩?含量測定 常溫,避光 20mg 111717-200501
42205 3,29-二苯甲?;闃侨嗜?常溫,避光 20mg 111724-
42206 柳穿魚葉苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111728-201001
42207 6-羥基-7-甲氧基香豆素 含量測定 常溫,避光 20mg 111741-200501
42208 當藥苷 含量測定 常溫,避光 20mg 111742-200501
42209 正丁醇 含量測定 常溫,避光 1ml 111743-200501
42210 1-羥基-3,4,5-*氧基山酮 含量測定 常溫,避光 10mg 111744-200501
42211 醋酸乙酯 含量測定 常溫,人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒避光 1ml 111746-200501
42212 20(S)-原人參二醇 含量測定 常溫,避光 20mg 111747-200501
42213 20(S)-人參皂苷Rh2 含量測定 常溫,避光 20mg 111748-200501
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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