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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-23 22:29:12瀏覽次數(shù):165次
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人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
41288 月桂酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 Lauroyl Polyoxylglycerides 500mg
41289 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
41290 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
41291 甲狀腺素標(biāo)準(zhǔn)品(峰值定性用) 15mg
41292 亞油酯酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 Linoleoyl Polyoxylglycerides 100mg
41293 洛匹那韋系統(tǒng)適配物標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
41294 氯碳頭孢L-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Loracarbef L-Isomer 25mg
41295 苯芴醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
41296 葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品 Lutein 1ml
41297 番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品 Lycopene 500mg
41298 錳福地吡相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
41299 錳福地吡相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
41300 錳福地吡相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
41301 醋酸*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
41302 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Mefloquine Related Compound A 20mg
41303 美侖孕酮醋酸酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
41304 美侖孕酮醋酸酯相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
41305 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
41306 *雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41307 *雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
41308 *雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41309 鯡魚油標(biāo)準(zhǔn)品 2ml
41310
3-巰基-2-甲丙酸1.2-二*鹽標(biāo)準(zhǔn)品
75mg
41311 美司那相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41312 美司那相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41313 間甲酚 1ml
41314 甲氧基甲基*標(biāo)準(zhǔn)品 Methoxymethylguanine 20mg
41315 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg
41316 3-鄰-甲基*標(biāo)準(zhǔn)品 3-O-Methylmethyldopa 50mg
41317 哌甲酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41318 美托洛爾相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
41319 美托洛爾相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41320 *混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Mirtazapine Resolution Mixture 25mg
41321 *標(biāo)準(zhǔn)品(系統(tǒng)適用性) 0.3mg
41322 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
41323 近紅外系統(tǒng)適用性參考標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品 Near IR System Suitability ea
41324 萘法唑酮相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Nefazodone Related Compound B 25mg
41325 甲磺酸奈非那韋標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
41326 新橙皮甙二氫查爾酮標(biāo)準(zhǔn)品 ea
41327 紐甜相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Neotame Related Compound A 15mg
41328 鹽酸去甲羥基*酮標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41329 油酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 Oleoyl Polyoxylglycerides 100mg
41330 *相關(guān)FG混合物標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
41331 昂丹司瓊分離度混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Ondansetron Resolution Mixture 50mg
41332 *相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
41333 奧芬那君相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
41334 奧芬那君相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒20mg
41335 奧塞米韋相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Oseltamivir Related Compound A 10mg
41336 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
41337 氧雄龍相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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