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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-20 06:58:31瀏覽次數(shù):198次
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人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
40439 鹽酸*標準品 Prilocaine Hydrochloride 200mg 1786-81-8
40440 *相關(guān)物質(zhì)A標準品 10mg 178422-42-9
40441 外消依法韋侖標準品 20mg 177530-93-7
40442 左*雜質(zhì)C標準品 25mg 177472-30-9
40443 D-氨基半乳糖鹽酸鹽標準品 Galactosamine Hydrochloride 300mg 1772-03-8
40444 多非利特相關(guān)物質(zhì)A標準品 Dofetilide Related Compound A 20mg 176447-94-2
40445 *丙標準品 Deslanoside 100mg 17598-65-1
40446 纈*鹽酸鹽標準品 Valganciclovir Hydrochloride 500mg 175865-59-5
40447 甲苯喹唑酮標準品 Metolazone 200mg 17560-51-9
40448 *雜質(zhì)C標準品 5mg 174794-02-6
40449 γ-環(huán)糊精標準品 Gamma Cyclodextrin 200mg 17465-86-0
40450 *鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)F標準品 30mg 174607-68-2
40451 *標準品 Riluzole 200mg 1744-22-5
40452 *標準品 Amiloride Hydrochloride 500mg 17440-83-4
40453 替扎尼定相關(guān)物質(zhì)B標準品 50mg 173532-15-5
40454 氯丙咪嗪標準品 Clomipramine Hydrochloride 200mg 17321-77-6
40455 奧洛他定相關(guān)物質(zhì)B標準品 35mg 173174-07-7
40456 莫達非尼相關(guān)物質(zhì)E標準品 Modafinil Related Compound E 20mg 1726-02-9
40457 *標準品 Danazol 200mg 17230-88-5
40458 *標準品 Mepivacaine Hydrochloride 200mg 1722-62-9
40459 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)C標準品 20mg 172015-79-1
40460 *相關(guān)物質(zhì)A標準品 50mg 1713-07-1
40461 鹽酸*標準品 200mg 1707-14-8
40462 鹽酸他克林標準品 Tacrine Hydrochloride 500mg 1684-40-8
40463 阿扎*A標準品 100mg 16801-85-9
40464 *C標準品 Erythromycin C 50mg 1675-02-1
40465 優(yōu)降糖相關(guān)物質(zhì)A標準品 25mg 16673-34-0
40466 鹽酸咪唑標準品 Levamisole Hydrochloride 125mg 16595-80-5
40467 鈉曲酮標準品 Naltrexone 200mg 16590-41-3
40468 紐甜標準品 Neotame 200mg 165450-17-9
40469 阿扎哌隆標準品 Azaperone 200mg 1649-18-9
40470 泛醇消旋體標準品 Panthenol, Racemic 200mg 16485-10-2
40471 枸櫞酸乙胺嗪標準品 Diethylcarbamazine Citrate 200mg 1642-54-2
40472 鹽酸*標準品 Propoxyphene Hydrochloride CII 1g 1639-60-7
40473 甲基叔丁基醚標準品 tert-Butylmethyl ether 1.2ml×3ampules 1634-04-4
40474 氯*標準品 Clonazepam CIV 200mg 1622-61-3
40475 *相關(guān)物質(zhì)A標準品 25mg 16150-44-0
40476 *相關(guān)物質(zhì)B標準品 75mg 160972-33-8
40477 醋酸帕拉米松標準品 Paramethasone Acetate 200mg 1597-82-6
40478 硬脂酸鈣標準品 Calcium Stearate (AS) 2g 1592-23-0
40479 *相關(guān)物質(zhì)B標準品 50mg 15883-20-2
40480 *相關(guān)物質(zhì)B標準品 25mg 158401-52-6
40481 *相關(guān)物質(zhì)D標準品 25mg 158401-51-5
40482 *標準品 Cromolyn Sodium 500mg 15826-37-6
40483 乙二胺四乙酸鐵鈉標準品 Sodium Iron EDTA 200mg 15708-41-5
40484 3-氨基丙醇標準品 人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒100mg 156-87-6
40485 *標準品 Ibuprofen 750mg 15687-27-1
40486 *標準品 Cisplatin 100mg 15663-27-1
40487 丁酸鈉標準品 Sodium Butyrate 25mg 156-54-7
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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