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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-23 23:11:39瀏覽次數(shù):438次
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人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒實(shí)驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
40389 泰諾福韋標(biāo)準(zhǔn)品 Tenofovir 15mg 206184-49-8
40390 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Oxytetracycline Hydrochloride 200mg 2058-46-0
40391 小白菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品 Parthenolide 25mg 20554-84-1
40392 磷酸奧斯他韋標(biāo)準(zhǔn)品 Oseltamivir Phosphate 200mg 204255-11-8
40393 *標(biāo)準(zhǔn)品 Clofazimine 200mg 2030-63-9
40394 5-*標(biāo)準(zhǔn)品 Flucytosine 200mg 2022-85-7
40395 泰諾福韋酯富馬酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Tenofovir Disoproxil Fumarate 200mg 202138-50-9
40396 氯*相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Clonazepam Related Compound B 25mg 2011-66-7
40397 雙*叔戊酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Flumethasone Pivalate 200mg 2002-29-1
40398 度洛西汀相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品 ea 199191-66-7
40399 二異丙酚相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 1988-11-0
40400 鹽酸*相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 1985-46-2
40401 *標(biāo)準(zhǔn)品 Amiodarone Hydrochloride 200mg 19774-82-4
40402 美司那標(biāo)準(zhǔn)品 Mesna 200mg 19767-45-4
40403 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 19740-72-8
40404 伊立替康相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 19685-09-7
40405 二氫*標(biāo)準(zhǔn)品 Dihydrocapsaicin 25mg 19408-84-5
40406 *標(biāo)準(zhǔn)品 Tinidazole 200mg 19387-91-8
40407 三氨喋啶相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 19375-89-4
40408 *外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 193146-85-9
40409 洛匹那韋標(biāo)準(zhǔn)品 Lopinavir 350mg 192725-17-0
40410 *標(biāo)準(zhǔn)品 Prazosin Hydrochloride 500mg 19237-84-4
40411 三氨喋啶相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 19152-93-3
40412 普拉克索鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 191217-81-9
40413 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 Verapamil Related Compound D 50mg 190850-50-1
40414 *標(biāo)準(zhǔn)品 Magnesium Salicylate 200mg 18917-95-8
40415 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 18910-70-8
40416 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 18910-68-4
40417 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Albuterol Related Compound A 25mg 18910-68-4
40418 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 0.1ml 1885-48-9
40419 外消旋阿巴卡韋標(biāo)準(zhǔn)品 Abacavir Sulfate Racemic 20mg 188062-50-2
40420 雙-乙基乙氧*甲氧苯基三嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Bemotrizinol 200mg 187393-00-6
40421 七甲基三硅氧烷標(biāo)準(zhǔn)品 Heptamethyl Trisiloxane 150mg 1873-88-7
40422 *標(biāo)準(zhǔn)品 Moxifloxacin Hydrochloride 200mg 186826-86-8
40423 美索比妥標(biāo)準(zhǔn)品 Methohexital CIV 500mg 18652-93-2
40424 黃肉楠堿標(biāo)準(zhǔn)品 Actein 20mg 18642-44-9
40425 甘油山崳酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 Glyceryl Behenate 200mg 18641-57-1
40426 *標(biāo)準(zhǔn)品 Albuterol 200mg 18559-94-9
40427 苯丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品 Phenylpropanediol 100mg 1855-09-0
40428 癸氧喹酯標(biāo)準(zhǔn)品 Decoquinate 200mg 18507-89-6
40429 富馬酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Formoterol Fumarate 100mg 183814-30-4
40430 普卡霉素標(biāo)準(zhǔn)品 Plicamycin 50mg 18378-89-7
40431 *相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 1836-62-0
40432 左*鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)G標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 182676-90-0
40433 *雜質(zhì)A人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒 10mg 182230-43-9
40434 *標(biāo)準(zhǔn)品 Bromazepam CIV (AS) 100mg 1812-30-2
40435 溴馬秦標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 1808-12-4
40436 茚地那維標(biāo)準(zhǔn)品 Indinavir 100mg 180683-37-8
40437 茚地那維標(biāo)準(zhǔn)品(系統(tǒng)適應(yīng)用) Indinavir System Suitability 100mg 180683-37-8
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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