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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-09 18:58:03瀏覽次數(shù):106次
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人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
39989 枸櫞酸奧芬那君標(biāo)準(zhǔn)品 Orphenadrine Citrate 200mg 4682-36-4
39990 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 467-13-0
39991 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 4656-86-4
39992 納洛酮標(biāo)準(zhǔn)品 Naloxone 125mg 465-65-6
39993 樟腦標(biāo)準(zhǔn)品 Camphor 1g 464-49-3
39994 福辛普利相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 46348-61-2
39995 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Riluzole Related Compound A 25mg 461-82-5
39996 *標(biāo)準(zhǔn)品 Lactulose 750mg 4618-18-2
39997 鹽酸*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 461-58-5
39998 姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品 Curcumin 30mg 458-37-7
39999 丁丙諾啡相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 457071-73-7
40000 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cyclandelate 200mg 456-59-7
40001 羥基洋地黃毒甙標(biāo)準(zhǔn)品 Gitoxin 50mg 4562-36-1
40002 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 455-14-1
40003 乙氧苯噻唑胺標(biāo)準(zhǔn)品 Ethoxzolamide 200mg 452-35-7
40004 *相關(guān)雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 Doxepin Related Compound C 25mg 4504-96-5
40005 *相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 Doxepin Related Compound B 50mg 4504-88-5
40006 *相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Doxepin Related Compound A 50mg 4504-87-4
40007 奧昔替林標(biāo)準(zhǔn)品 Oxtriphylline 500mg 4499-40-5
40008 *標(biāo)準(zhǔn)品 Azathioprine 200mg 446-86-6
40009 金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)品 Genistein 15mg 446-72-0
40010 4-差向脫水四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 4465-65-0
40011 *標(biāo)準(zhǔn)品 Metronidazole 100mg 443-48-1
40012 氧雄龍相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 4424-45-7
40013 鹽酸三氟拉嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Trifluoperazine Hydrochloride 200mg 440-17-5
40014 依法韋侖相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 cards 440124-96-9
40015 諾龍標(biāo)準(zhǔn)品 Nandrolone CIII 50mg 434-22-0
40016 羥甲稀龍標(biāo)準(zhǔn)品 Oxymetholone CIII 200mg 434-07-1
40017 奧昔布寧相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 4335-77-7
40018 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 433289-83-9
40019 酒石酸異丁嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Trimeprazine Tartrate 200mg 4330-99-8
40020 苯硫咪唑標(biāo)準(zhǔn)品 Fenbendazole 100mg 43210-67-9
40021 曲地氯銨標(biāo)準(zhǔn)品 Tridihexethyl Chloride 200mg 4310-35-4
40022 *標(biāo)準(zhǔn)品 Vinpocetine 100mg 42971-09-5
40023 *標(biāo)準(zhǔn)品 Nabumetone 200mg 42924-53-8
40024 克拉曲濱標(biāo)準(zhǔn)品 Cladribine 200mg 4291-63-8
40025 *標(biāo)準(zhǔn)品 Fluorometholone 200mg 426-13-1
40026 *酯鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Cefamandole Nafate 200mg 42540-40-9
40027 氟尼辛*標(biāo)準(zhǔn)品 Flunixin Meglumine 300mg 42461-84-7
40028 全氟碳標(biāo)準(zhǔn)品 Perflubron 0.5ml 423-55-2
40029 康格爾標(biāo)準(zhǔn)品 Nadolol 200mg 42200-33-9
40030 *標(biāo)準(zhǔn)品 Clonidine Hydrochloride 200mg 4205-91-8
40031 可樂定標(biāo)準(zhǔn)品 Clonidine 200mg 4205-90-7
40032 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Mezlocillin Sodium 350mg 42057-22-7
40033 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 25mg 42019-78-3
40034 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 42017-89-0
40035 茴香腦標(biāo)準(zhǔn)品 Anethole (AS) 2ml 4180-23-8
40036 環(huán)砒酮胺標(biāo)準(zhǔn)品 Ciclopirox Olamine 125mg 41621-49-2
40037 *標(biāo)準(zhǔn)品 Carboplatin 100mg 41575-94-4
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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