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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-23 17:17:18瀏覽次數(shù):153次
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人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
39739 孕酮標(biāo)準(zhǔn)品 Progesterone 200mg 57-83-0
39740 甜菊糖標(biāo)準(zhǔn)品 Stevioside 30mg 57817-89-7
39741 多庫脂鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Docusate Sodium 500mg 577-11-7
39742 *標(biāo)準(zhǔn)品 Sulfamethazine 1g 57-68-1
39743 *標(biāo)準(zhǔn)品 Probenecid 200mg 57-66-9
39744 水楊酸毒扁豆堿標(biāo)準(zhǔn)品 Physostigmine Salicylate 200mg 57-64-7
39745 *標(biāo)準(zhǔn)品 Ethinyl Estradiol 150mg 57-63-6
39746 丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品 Propylene Glycol 1ml 57-55-6
39747 *標(biāo)準(zhǔn)品 Meprobamate CIV 200mg 57-53-4
39748 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品 Sucrose 100mg 57-50-1
39749 D-(-)-果糖標(biāo)準(zhǔn)品 Fructose 125mg 57-48-7
39750 莫達(dá)非尼相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 Modafinil Related Compound D 20mg 574-42-5
39751 乙酰丙酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品 Calcium Levulinate (AS) 1g 5743-49-7
39752 抗壞血酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品 Calcium Ascorbate 200mg 5743-28-2
39753 馬來酸甲*標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 57432-61-8
39754 異戊*CII標(biāo)準(zhǔn)品 Amobarbital CII 200mg 57-43-2
39755 苯妥英標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 57-41-0
39756 潑尼卡酯相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 5740-62-5
39757 *相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 57327-92-1
39758 鹽酸烯丙*標(biāo)準(zhǔn)品 Nalorphine Hydrochloride CIII 250mg 57-29-4
39759 L-賴氨酸醋酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 L-Lysine Acetate 200mg 57282-49-2
39760 丹曲林相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 57268-33-4
39761 雌二醇相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 571-92-6
39762 馬尿酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Methenamine Hippurate 200mg 5714-73-8
39763 馬來酸醋*標(biāo)準(zhǔn)品 Acetophenazine Maleate 200mg 5714-00-1
39764 尿酸標(biāo)準(zhǔn)品 Urea 200mg 57-13-6
39765 氯革酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品 Clorazepate Dipotassium CIV 125mg 57109-90-7
39766 西曲溴銨標(biāo)準(zhǔn)品 Cetrimonium Bromide 1g 57-09-0
39767 萘法唑酮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 Nefazodone Related Compound A 25mg 57059-62-8
39768 *標(biāo)準(zhǔn)品 Desflurane 0.5ml 57041-67-5
39769 *標(biāo)準(zhǔn)品 Chlorhexidine Acetate 500mg 56-95-1
39770 地美溴銨標(biāo)準(zhǔn)品 Demecarium Bromide 250mg 56-94-0
39771 組胺二鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Histamine Dihydrochloride 250mg 56-92-8
39772 L-*標(biāo)準(zhǔn)品 Cystine 200mg 56-89-3
39773 *標(biāo)準(zhǔn)品 Glutamic Acid 200mg 56-86-0
39774 *標(biāo)準(zhǔn)品 Glutamine 100mg 56-85-9
39775 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 Glycerin 2ml 56-81-5
39776 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefmetazole 200mg 56796-20-4
39777 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Flurbiprofen Sodium 200mg 56767-76-1
39778 *標(biāo)準(zhǔn)品 Chloramphenicol 200mg 56-75-7
39779 美托洛爾相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 56718-76-4
39780 *標(biāo)準(zhǔn)品 Diethylstilbestrol 200mg 56-53-1
39781 醋酸去氧皮質(zhì)酮標(biāo)準(zhǔn)品 Desoxycorticosterone Acetate 200mg 56-47-3
39782 L-*標(biāo)準(zhǔn)品 L-Serine 200mg 56-45-1
39783 L-*標(biāo)準(zhǔn)品 L-Alanine 200mg 56-41-7
39784 *標(biāo)準(zhǔn)品人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 Glycine 200mg 56-40-6
39785 *標(biāo)準(zhǔn)品 Metoprolol Tartrate 200mg 56392-17-7
39786 鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品 Fluoxetine Hydrochloride 200mg 56296-78-7
39787 海索比妥標(biāo)準(zhǔn)品 Hexobarbital CIII 500mg 56-29-1
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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