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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-03-14 13:09:25瀏覽次數(shù):129次
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人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
39241 甲*標(biāo)準(zhǔn)品 Levonorgestrel 200mg 797-63-7
39242 *外消旋混合物標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 79617-89-3
39243 *標(biāo)準(zhǔn)品 Sertraline Hydrochloride 100mg 79559-97-0
39244 *標(biāo)準(zhǔn)品 Levocabastine Hydrochloride 50mg 79547-78-7
39245 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefixime 500mg 79350-37-1
39246 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 79350-10-0
39247 乙酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品 Methyl Acetate 1.2ml×3ampules 79-20-9
39248 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 791-28-6
39249 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 79088-29-2
39250 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 79081-87-1
39251 2-丁酮¤標(biāo)準(zhǔn)品 Methyl Ethyl Ketone 1.2ml×3ampules 78-93-3
39252 仲丁醇標(biāo)準(zhǔn)品 2-Butanol 1.2ml×3ampules 78-92-2
39253 2-甲基-1-丙醇標(biāo)準(zhǔn)品 2-Methyl-1-propanol 1.2ml×3ampules 78-83-1
39254 *標(biāo)準(zhǔn)品 Flumazenil 200mg 78755-81-4
39255 *標(biāo)準(zhǔn)品 Terbinafine Hydrochloride 200mg 78628-80-5
39256 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 78454-17-8
39257 卡立普多標(biāo)準(zhǔn)品 Carisoprodol 1g 78-44-4
39258 *五水合物標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftazidime Pentahydrate 300mg 78439-06-2
39259 *標(biāo)準(zhǔn)品 Milrinone 500mg 78415-72-2
39260 甲溴菲寧標(biāo)準(zhǔn)品 Mebrofenin 100mg 78266-06-5
39261 *標(biāo)準(zhǔn)品 Potassium Guaiacolsulfonate 500mg 78247-49-1
39262 *標(biāo)準(zhǔn)品 Aztreonam 200mg 78110-38-0
39263 磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品 Sulfamerazine 500mg 7-79-7
39264 奎寧酸標(biāo)準(zhǔn)品 Quinic Acid 200mg 77-95-2
39265 檸檬酸三丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 Tributyl Citrate 500mg 77-94-1
39266 檸檬酸三乙酯標(biāo)準(zhǔn)品 Triethyl Citrate 500mg 77-93-0
39267 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品 Citric Acid 200mg 77-92-9
39268 氯化鎂標(biāo)準(zhǔn)品 Magnesium Chloride (AS) 1g 7791-18-6
39269 乙酰檸檬酸三丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 Acetyltributyl Citrate 500mg 77-90-7
39270 乙酰檸檬酸三乙酯標(biāo)準(zhǔn)品 Acetyltriethyl Citrate 500mg 77-89-4
39271 *標(biāo)準(zhǔn)品 Doxazosin Mesylate 200mg 77883-43-3
39272 三羥甲基氨基甲烷標(biāo)準(zhǔn)品 Tromethamine 125mg 77-86-1
39273 磷酸氫二銨標(biāo)準(zhǔn)品 1g 7783-28-0
39274 磷標(biāo)準(zhǔn)品 5g 7778-77-0
39275 乙琥胺標(biāo)準(zhǔn)品 Ethosuximide 500mg 77-67-8
39276 磷酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品 Magnesium Phosphate (AS) 2g 7757-87-1
39277 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 77517-29-4
39278 甲琥胺標(biāo)準(zhǔn)品 Methsuximide 500mg 77-41-8
39279 *相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 Lorazepam Related Compound E 25mg 773871-49-1
39280 *標(biāo)準(zhǔn)品 Chlorthalidone 200mg 77-36-1
39281 氟尼縮松標(biāo)準(zhǔn)品 Flunisolide 200mg 77326-96-6
39282 布他比妥標(biāo)準(zhǔn)品 Butalbital CIII 200mg 77-26-9
39283 尼扎替定標(biāo)準(zhǔn)品 Nizatidine 200mg 76963-41-2
39284 *醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 250mg 7695-91-2
39285 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 20mg 76-93-7
39286 溴化甲哌佐酯標(biāo)準(zhǔn)品 Mepenzolate Bromide 200mg 76-90-4
39287 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 7682-20-4
39288 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 76820-34-3
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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