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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-09 17:57:23瀏覽次數(shù):330次
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人*2(VD2)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人*2(VD2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人*2(VD2)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
37557 海索比妥標(biāo)準(zhǔn)品 Hexobarbital CIII 500mg 56-29-1
37558 鹽酸??丝ㄒ驑?biāo)準(zhǔn)品 Hexylcaine Hydrochloride 1g 532-76-3
37559 己烯乙二醇標(biāo)準(zhǔn)品 Hexylene Glycol 125mg 107-41-5
37560 己基*標(biāo)準(zhǔn)品 Hexylresorcinol 200mg 136-77-6
37561 L-*標(biāo)準(zhǔn)品 L-Histidine 200mg 71-00-1
37562 組胺二鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Histamine Dihydrochloride 250mg 56-92-8
37563 *標(biāo)準(zhǔn)品 Homatropine Hydrobromide 200mg 51-56-9
37564 甲溴后馬托品標(biāo)準(zhǔn)品 Homatropine Methylbromide 250mg 80-49-9
37565 均聚物聚丙烯標(biāo)準(zhǔn)品 Homopolymer Polypropylene 3 strips 9003-07-0
37566 原膜散酯標(biāo)準(zhǔn)品 Homosalate 500mg 118-56-9
37567 *標(biāo)準(zhǔn)品 Hydralazine Hydrochloride 200mg 304-20-1
37568 白毛莨堿標(biāo)準(zhǔn)品 Hydrastine 10mg 118-08-1
37569 雙氫*標(biāo)準(zhǔn)品 Hydrochlorothiazide 200mg 58-93-5
37570 氫氟甲噻標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroflumethiazide 200mg 135-09-1
37571 鹽酸氫*酮標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 71-68-1
37572 *標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroquinone 500mg 123-31-9
37573 氫溴酸羥苯丙胺標(biāo)準(zhǔn)品 200mg 306-21-8
37574 己酸孕酮標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxyprogesterone Caproate 200mg 630-56-8
37575 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 93446-04-9
37576 羥丙基-β-環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxypropyl Betadex 200mg 128446-35-5
37577 羥丙基甲基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品 250mg 9004-65-3
37578 12-羥基硬脂酸標(biāo)準(zhǔn)品 12-Hydroxystearic Acid 200mg 106-14-9
37579 *標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxyurea 200mg 127-07-1
37580 鹽酸羥嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxyzine Hydrochloride 500mg 2192-20-3
37581 鹽酸羥嗪相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 303-26-4
37582 雙羥萘酸羥嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxyzine Pamoate 500mg 10246-75-0
37583 天仙子胺相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
37584 金絲桃甙標(biāo)準(zhǔn)品 Hyperoside 50mg 482-36-0
37585 醋酸琥珀羥丙甲纖維素標(biāo)準(zhǔn)品 Hypromellose Acetate Succinate 100mg 71138-97-1
37586 鄰苯二甲酸羥丙甲纖維素酯標(biāo)準(zhǔn)品 Hypromellose Phthalate 100mg 9050-31-1
37587 *標(biāo)準(zhǔn)品 Ibandronate Sodium 100mg 138926-19-9
37588 伊班膦酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 625120-81-2
37589 *標(biāo)準(zhǔn)品 Ibuprofen 750mg 15687-27-1
37590 *相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 0.2ml×3ampules 38861-78-8
37591 鹽酸依達(dá)比星標(biāo)準(zhǔn)品 Idarubicin Hydrochloride 50mg 57852-57-0
37592 *標(biāo)準(zhǔn)品 Idoxuridine 250mg 54-42-2
37593 異*標(biāo)準(zhǔn)品 Ifosfamide 500mg 3778-73-2
37594 咪唑標(biāo)準(zhǔn)品 Imidazole 200mg 288-32-4
37595 雙咪唑烷基脲標(biāo)準(zhǔn)品 Imidurea 200mg 39236-46-9
37596 亞氨基二芐標(biāo)準(zhǔn)品 Iminodibenzyl 25mg 494-19-9
37597 *一水合物標(biāo)準(zhǔn)品 Imipenem Monohydrate 100mg 74431-23-5
37598 鹽酸丙咪嗪標(biāo)準(zhǔn)品 Imipramine Hydrochloride 200mg 113-52-0
37599 *標(biāo)準(zhǔn)品 Indapamide 250mg 26807-65-8
37600 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 63968-75-2
37601 靛藍(lán)胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)品 Indigotindisulfonate Sodium 500mg 860-22-0
37602 茚地那維標(biāo)準(zhǔn)品 Indinavir人*2(VD2)ELISA試劑盒 100mg 180683-37-8
37603 茚地那維標(biāo)準(zhǔn)品(系統(tǒng)適應(yīng)用) Indinavir System Suitability 100mg 180683-37-8
37604 *標(biāo)準(zhǔn)品 Indocyanine Green 200mg 3599-32-4
37605 肌醇標(biāo)準(zhǔn)品 Inositol 500mg 87-89-8
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人*2(VD2)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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