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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
36407 己二酸標(biāo)準(zhǔn)品 Adipic Acid 100mg 124-04-9
36408 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 120511-72-0
36409 *標(biāo)準(zhǔn)品 Bismuth Subsalicylate 100mg 14882-18-9
36410 堿式?jīng)]食子酸鉍標(biāo)準(zhǔn)品 Bismuth Subgallate (AS) 2g 99-26-3
36411 *雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
36412 共聚維酮標(biāo)準(zhǔn)品 Copovidone 100mg
36413 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 72-40-2
36414 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 4656-86-4
36415 5-氟脲嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品 Fluorouracil 250mg 51-21-8
36416 羥丙基纖維素標(biāo)準(zhǔn)品 Hydroxypropyl Cellulose 500mg 9004-64-2
36417 左*相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 35mg 100986-89-8
36418 美司那標(biāo)準(zhǔn)品 Mesna 200mg 19767-45-4
36419 莫西沙星相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 151213-15-9
36420 那拉曲坦混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Naratriptan Resolution Mixture 20mg
36421 *標(biāo)準(zhǔn)品 Niacin 200mg 59-67-6
36422 *9標(biāo)準(zhǔn)品 Nonoxynol 9 0.5ml 26571-11-9
36423 *標(biāo)準(zhǔn)品 Pancreatin Amylase and Protease (COLD SHIPMENT REQUIRED),Diastase vera;Pancrease 2g 8049-47-6
36424 *標(biāo)準(zhǔn)品 Prilocaine 200mg 721-50-6
36425 利塞膦酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 105462-23-5
36426 利塞膦酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
36427 利塞膦酸相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 75755-10-1
36428 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品 Sucrose 100mg 57-50-1
36429 外消旋阿巴卡韋標(biāo)準(zhǔn)品 Abacavir Sulfate Racemic 20mg 188062-50-2
36430 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 124752-25-6
36431 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
36432 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 172015-79-1
36433 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 136470-78-5
36434 阿巴卡韋系統(tǒng)適應(yīng)性混合物標(biāo)準(zhǔn)品 Abacavir Stereoisomers Mixture 15mg
36435 阿巴卡韋立體異構(gòu)體混合物標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
36436 鹽酸醋丁洛爾標(biāo)準(zhǔn)品 Acebutolol Hydrochloride 125mg 34381-68-5
36437 醋丁洛爾相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 40188-45-2
36438 醋硝香豆素標(biāo)準(zhǔn)品 Acenocoumarol 200mg 152-72-7
36439 乙酰丙嗪馬來(lái)酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 Acepromazine Maleate 250mg 3598-37-6
36440 安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品 Acesulfame Potassium 200mg 55589-62-3
36441 *標(biāo)準(zhǔn)品 Acetaminophen 400mg 103-90-2
36442 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 2623-33-8
36443 N-乙酰對(duì)氨基酚相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
36444 N-乙酰對(duì)氨基酚相關(guān)雜質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
36445 N-乙酰對(duì)氨基酚相關(guān)雜質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
36446 N-乙酰對(duì)氨基酚相關(guān)雜質(zhì)J標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
36447 乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)品 500mg 103-84-4
36448 *標(biāo)準(zhǔn)品 Acetazolamide 2g 59-66-5
36449 冰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品 Glacial Acetic Acid 1.5ml×3ampules
36450 醋磺環(huán)已脲標(biāo)準(zhǔn)品 Acetohexamide 250mg 968-81-0
36451 乙酰氧肟酸標(biāo)準(zhǔn)品 Acetohydroxamic Acid 200mg 546-88-3
36452 丙酮 人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒Acetone 1.5ml×3ampules 67-64-1
36453 馬來(lái)酸醋*標(biāo)準(zhǔn)品 Acetophenazine Maleate 200mg 5714-00-1
36454 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 53990-51-5
36455 氯化乙酰*標(biāo)準(zhǔn)品 Acetylcholine Chloride 200mg 60-31-1
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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