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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-21 08:25:19瀏覽次數(shù):144次
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人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
34781 小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 Mouse growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit 96T/48T
34782 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性*蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒 Mouse Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit 96T/48T
34783 小鼠溴脫氧核苷*(BrdU)ELISA試劑盒 Mouse Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA Kit 96T/48T
34784 小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 Mouse transforming growth factorβ2,TGFβ2 ELISA Kit 96T/48T
34785 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒 Mouse α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit 96T/48T
34786 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 Mouse monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA Kit 96T/48T
34787 小鼠過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒 Mouse peroxisome proliferators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit 96T/48T
34788 小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒 Mouse Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit 96T/48T
34789 小鼠網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒 Mouse omentin ELISA Kit 96T/48T
34790 小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒 Mouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit 96T/48T
34791 小鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒 Mouse Protein Phosphatase,PP ELISA Kit 96T/48T
34792 小鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒 Mouse thioredoxin reductase,TrxR ELISA Kit 96T/48T
34793 小鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒 Mouse Thioredoxin,Trx ELISA Kit 96T/48T
34794 小鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒 Mouse Collagenase Type II ELISA Kit 96T/48T
34795 小鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒 Mouse Collagenase I ELISA Kit 96T/48T
34796 小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒 Mouse phospho Protein Kinase C,P-PKC ELISA Kit 96T/48T
34797 小鼠磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒 Mouse phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit 96T/48T
34798 小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA試劑盒 Mouse calcium channel blockers,CCB ELISA Kit 96T/48T
34799 小鼠*轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)ELISA試劑盒 Mouse Alanine Aminotransferase,ALT/GPT ELISA Kit 96T/48T
34800 小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒 Mouse bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit 96T/48T
34801 小鼠*結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒 Mouse Retinol-binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit 96T/48T
34802 小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒 Mouse 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit 96T/48T
34803 小鼠戊糖素(Pentosidine)ELISA試劑盒 Mouse Pentosidine ELISA Kit 96T/48T
34804 小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒 Mouse advanced glycation end products,AGEs ELISA Kit 96T/48T
34805 小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒 Mouse L-Selectin ELISA Kit 96T/48T
34806 小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 Mouse neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit 96T/48T
34807 小鼠幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 Mouse Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit 96T/48T
34808 小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA試劑盒 Mouse Dopamine D1 receptor,D1R ELISA Kit 96T/48T
34809 小鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒 Mouse adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit 96T/48T
34810 小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒 Mouse Calretinin,CR ELISA Kit 96T/48T
34811 小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒 Mouse Hya]uronate binding protein,HABP ELISA Kit 96T/48T
34812 小鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒 Mouse cyclophilin A,CyPA ELISA Kit 96T/48T
34813 小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒 96T/48T
34814 小鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒 Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 96T/48T
34815 小鼠抗利尿激素/血管加壓素/*加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒 Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin,ADH/VP/AVP ELISA Kit 96T/48T
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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