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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
34493 人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒 Human soluble fibrin monomer complex,SFMC ELISA Kit 96T/48T
34494 人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒 Human 2,3-dinor thromboxane B2,2,3-dinor-TXB2 ELISA Kit 96T/48T
34495 人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒 Human 11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit 96T/48T
34496 人纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒 Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit 96T/48T
34497 人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒 Human plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit 96T/48T
34498 人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒 Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit 96T/48T
34499 人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒 Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit 96T/48T
34500 人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒 Human Haptoglobin,Hpt/HP ELISA Kit 96T/48T
34501 人血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 Human 50% complement hemolysis,CH50 ELISA Kit 96T/48T
34502 人過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit 96T/48T
34503 人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 5a,C5a ELISA Kit 96T/48T
34504 人補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒 Human Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit 96T/48T
34505 人*Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒 Human coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISA Kit 96T/48T
34506 人*Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒 Human coagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA Kit 96T/48T
34507 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒 Human von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit 96T/48T
34508 人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒 Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit 96T/48T
34509 人*抗*復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒 Human thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit 96T/48T
34510 人抗*受體(ATR)ELISA試劑盒 Human anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit 96T/48T
34511 人*受體(TR)ELISA試劑盒 Human thrombin receptor,TR ELISA Kit 96T/48T
34512 人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 Human Factor Ⅷ-related Antigen,FⅧAg ELISA Kit 96T/48T
34513 人血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒 Human Fibrinogen,Fbg ELISA Kit 96T/48T
34514 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒 Human major histocompatibility complex Ⅰ,MHCⅠ/HLAⅠ ELISA Kit 96T/48T
34515 人抗*Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒 Human Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit 96T/48T
34516 人血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒 Human thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit 96T/48T
34517 人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒 Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 96T/48T
34518 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(lèi)(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒 Human major histocompatibility complex Ⅲ,MHCⅢ/HLA-Ⅲ ELISA Kit 96T/48T
34519 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒 Human major histocompatibility complex Ⅱ,MHCⅡ/HLA-Ⅱ ELISA Kit 96T/48T
34520 人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒 Human β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit 96T/48T
34521 人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒 Human Plaet Factor 4,PF-4 ELISA Kit 96T/48T
34522 人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒 Human lymphocyte function associated antigen 2,LFA-2 ELISA Kit 96T/48T
34523 人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 Human Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit 96T/48T
34524 人Salusin-α ELISA試劑盒 Human Salusin α ELISA Kit 96T/48T
34525 人胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA試劑盒 human Insulin receptor substrate 2,IRS-2 ELISA Kit人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒 96T/48T
34526 人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒 Human transthyretin,TTR ELISA Kit 96T/48T
34527 人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)ELISA試劑盒 Human advanced oxidation protein products,AOPP ELISA Kit 96T/48T
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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