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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-03-13 21:08:24瀏覽次數(shù):176次
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人脂多糖/內毒素(LPS)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人脂多糖/內毒素(LPS)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人脂多糖/內毒素(LPS)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質量。
32741 芝麻酚 Sesamol 533-31-3 C7H6O3 138.12 20mg
32742 芝麻林素 Sesamolin 526-07-8 20mg
32743 梣酮 Fraxinellone 28808-62-0 C14H16O3 232.277 20mg
32744 植酸(UV98%) Phytic acid 83-86-3 C6H18O24P6 660.04 20mg
32745 竹節(jié)參皂苷IVa Chikusetsu saponin Ⅳa 51415-02-2 C42H66O14 20mg
32746 竹節(jié)香附素A Raddeanin(Anemodeanin) A 89412-79-3 C47H76O16 897.101 20mg
32747 多巴 Levodopa 59-92-7 C9H11NO4 197.19 20mg
32748 棕櫚酸 Palmitic acid 1957-10-3 C16H32O2 256.42 20mg
32749 紫檀芪 Pterostilbene 537-42-8 C16H16O3 256.3 20mg
32750 紫莖女貞苷A(95%) Ligupurpuroside A 147396-01-8
C35H46O19
770.74
10mg
32751 紫莖女貞苷B Ligupurpuroside B 147396-02-9
C35H46O17
738.74
10mg
32752 紫莖女貞苷C(95%) Ligupurpuroside C C35H46O17
738.74
10mg
32753 紫莖女貞苷D (95%) Ligupurpuroside D C35H46O18
754.74
10mg
32754 cis-紫莖女貞苷B (95%) cis- Ligupurpuroside B C35H46O17
738.74
10mg
32755 蒼術素醇 20mg
32756 骨化二醇 Calcifediol 63283-36-3 C27H44O2 400.64 20mg
32757 * Calcifediol 19356-17-3 C27H44O2 400.64 10mg
32758 雷帕霉素 Sirolimus 53123-88-9 C51H79NO13 914.18 20mg
32759 * Tacrolimus 104987-11-3 C44H69NO12 804.02 20mg
32760 小檗紅堿 Berberrubine 15401-69-1 C19H15NO4 321.33
32761 去亞甲基小檗堿
32762 瑞枯靈 485-19-8
32763 歐夾竹桃苷 oleandrin
32764 硫秋水仙苷 Acetamide
32765 野馬追內酯A Eupalinolide A 877822-41-8 20mg
32766 山茱萸新苷 Cornuside 131189-57-6 20mg
32767 β,β-二甲基丙烯酰紫草素 β,β-Dimethylacrylshikonin 24502-79-2 20mg
32768 白蠟樹精 Fraxinol 486-28-2 20mg
32769 異補骨脂二氫黃酮 Isobavachin
31524-62-6 20mg
32770 山奈酚-3-葡萄糖鼠李糖苷 20mg
32771 靈芝酸A(97%) 20mg
32772 茶黃素 20mg
32773 人參皂苷Rh1 Ginsenoside Rh 1 63223-86-9 C35H60O9 624.85 20mg
32774 金合歡素 Acacetin 480-44-4 C16H12O5 284.26 20mg
32775 氧化白藜蘆醇 20mg
32776 升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷 Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside 27994-11-2 C35H56O9
620.81
10mg
32777 胡麻屬苷 20mg
32778 (-)-丁香樹脂酚-4-0-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷 BRUSATOL C26H32O11 520.54 10mg
32779 肉堿 L(-)-Carnitine 541-15-1 C7H15NO3 161.2 20mg
32780 正丁胺 Butylamine 109-73-9 C4H11N 73.14 50mg
32781 * D-Alanine 338-69-2 C3H7NO2 89.09 20mg
32782 L-苯* L-Phenylalanine 63-91-2 C9H11NO2 165.19 20mg
32783 * Dacarbazine 4342-3-4 C6H10N6O 182.18 20mg
32784 蛋氨酸 L-Methionine 63-68-3 C5H11NO2S 149.21 20mg
32785 L-蛋氨酸 L-Methionine 63-68-3 C5H11NO2S 149.21 20mg
32786 腐胺 1,4-Diaminobutane 110-60-1 C4H12N2 88.15 20mg
32787 L-* L-Glutamic acid 56-86-0 C5H9NO4 147.13 20mg
32788 * Glycine 56-40-6 C2H5NO2 75.07 20mg
32789 L-* L-Cystine 56-89-3 C6H12N2O4S2 240.3 20mg
32790 L-* Glutathione 70-18-8 C20H32N6O12S2 612.63 20mg
32791 L-* L-Glutamine 56-85-9 C5H10N2O3 146.14 20mg
32792 L-* L(+)-Arginine 74-79-3 C6H14N4O2 174.2 20mg
32793 三環(huán)[3.3.1.13.7]癸烷;金鋼烷;三環(huán)[3.3.1.1]癸烷 281-23-2 C10H16 136.23 20mg
32794 2-金剛烷酮 2-Adamantanone 700-58-3 C10H14O 150.22 20mg
32795 三環(huán)[3.3.1.1(3,7)]癸烷-2-醇;2-金剛醇;2-2-金剛烷醇醇 700-57-2 C10H16O 152.23 20mg
32796 雷帕霉素 Sirolimus 53123-88-9 C51H79NO13 914.18 20mg
32797 *人脂多糖/內毒素(LPS)ELISA試劑盒 Tacrolimus 104987-11-3 C44H69NO12 804.02 20mg
32798 L-* L-Leucine 61-90-5 C6H13NO2 131.17 20mg
32799 賴氨酸 L-Lysine 56-87-1 C6H14N2O2 146.19 20mg
32800 L-* L-Tyrosine 60-18-4 C9H11NO3 181.19 20mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人脂多糖/內毒素(LPS)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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