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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
32373 芒果苷 Mangiferin 4773-96-0 C19H18O11 422.34 20mg
32374 新芒果苷 Neomangiferin 64809-67-2 C25H28O16 584.48022 20mg
32375 異土木香內(nèi)酯 Isoalantolactone 470-17-7 C15H20O2 232.32 20mg
32376 土木香內(nèi)酯 Alantolactone 546-43-0 C15H20O2 232.32 20mg
32377 去氫木香內(nèi)酯 Dehydrocostuslactone 477-43-0 C15H18O2 230.3 20mg
32378 木香烴內(nèi)酯 Costunolide 553-21-9 C15H20O2 232.32 20mg
32379 牡荊素 Vitexin 3681-93-4 C21H20O10 432.38 20mg
32380 異牡荊苷 Isovitexin with 29702-25-8 C21H20O10 432.38 20mg
32381 迷迭香酸 Rosmarinic acid 20283-92-5 C18H16O8 360.31 20mg
32382 鼠尾草酸 Carnosic acid 3650-9-7 C20H28O4 332.43 20mg
32383 鼠尾草酚 Carnosol 5957-80-2 C20H26O4 330.42 20mg
32384 木蘭脂素 Magnolin 31008-18-1 C23H28O7 416.46 20mg
32385 木蘭花堿 Magnoflorine 2141-9-5 C20H24NO4+ 342.408 20mg
32386 莫諾苷 Morroniside 25406-64-8 C17H26O11 406.38 20mg
32387 馬兜鈴酸A Aristolochic acid A 313-67-7 C17H11NO7 341.27 20mg
32388 7-羥基馬兜鈴酸 A 7-hydroxy aristolochic acid A 79185-75-4 C17H11NO8 357.273 10mg
32389 馬兜鈴酸 C Aristolochic acid C 4849-90-5 C16H9NO7 327.25 10mg
32390 馬兜鈴內(nèi)酰胺 Aristolactam I 13395-02-3 20mg
32391 馬卡因 Maackiain 19908-48-6 C16H12O5 284.26 20mg
32392 蔓荊子黃素 Casticin 479-91-4 C19H18O8 374.34 20mg
32393 牡荊素鼠李糖苷 Vitexin-2-O-rhamnoside 64820-99-1 C27H30O14 578.52 20mg
32394 牡荊素葡萄糖苷 glucosylvitexin 76135-82-5 C27H30O15 594.519 20mg
32395 綿馬貫眾素ABBA Dryocrassin ABBA 12777-70-7 C43H48O16 820.81 20mg
32396 白綿馬素AA Albaspidin AA 3570-40-9 10mg
32397 白綿馬素AP Albaspidin AP 59092-91-0 10mg
32398 馬鞭草苷 Verbenalin 548-37-8 C17H24O10 388.37 20mg
32399 5-羥基馬鞭草苷 Hastatoside 50816-24-5 C17H24O11 404.366 10mg
32400 木通苯乙醇苷B Calceorioside B 105471-98-5 C23H26O11 478.43 10mg
32401 毛蘭素 Phenol 95041-90-0 C18H22O5 318.36 20mg
32402 毛萼結(jié)甲(95%) Maoecrystal A C22H28O6 388.45 20mg
32403 3-O-沒(méi)食子酰粘酸 3-O-galloylmucic acid C13H14O12 362.24
10mg
32404 D-木糖 D-Xylose 31178-70-8 C5H10O5 150.13 20mg
32405 麥芽糖 Maltose 69-79-4 C12H22O11 342.3 20mg
32406 木蝴蝶苷A Oroxin A C21H20O10 432.38 20mg
32407 木蝴蝶苷B Oroxin B C27H30O15 594.52 20mg
32408 尼泊金丙 Propylparaben 94-13-3 C10H12O3 180.2 20mg
32409 尼泊金甲 Methylparaben 99-76-3 C8H8O3 152.15 20mg
32410 尼泊金丁 Butylparaben 94-26-8 C11H14O3 194.23 20mg
32411 尼泊金乙 Ethylparaben 120-47-8 C9H10O3 166.17 20mg
32412 牛蒡子苷元 Arctigenin 7770-78-7 C21H24O6 372.41 20mg
32413 牛蒡子苷 Arctiin 20362-31-6 C27H34O11 534.55 20mg
32414 檸檬苦素 Limonin 1180-71-8 C26H30O8/C18H19NO5 470.51/329.34 20mg
32415 ?;撬?Taurine 107-35-7 C2H7NO3S 125.15 20mg
32416 * Chenodeoxycholic acid 474-25-9 C24H40O4 392.57 20mg
32417 * Hyodeoxycholic acid 83-49-8 C24H40O4 392.57 20mg
32418 * Ursodeoxycholic acid 128-13-2 C24H40O4 392.57 20mg
32419 牛磺* Taurochenodeoxycholic Acid 516-35-8 C26H45NO6S 499.7 20mg
32420 ?;? Tauroursodeoxycholic acid 14605-22-2 C26H45NO6S 499.7 20mg
32421 * Allantoin 97-59-6 C4H6N4O3 158.12 20mg
32422 白頭翁皂苷A3 Anemoside A3 129724-84-1 C41H66O12 750.96 20mg
32423 尼奧林 Neoline,Bullatine B 466-26-2 C24H39NO6 437.573 20mg
32424 蟛蜞菊內(nèi)酯 wedelolactone 524-12-9 C16H10O7 314.25 20mg
32425 異去甲蟛蜞菊內(nèi)酯 Demethylwedelolactone 6468-55-9 C15H8O7 300.221 20mg
32426 * Ubidecarenone 303-98-0 C59H90O4 863.34 20mg
32427 L-* 2-Pyrrolidinecarboxylic acid 147-85-3 C5H9NO2 115.13 20mg
32428 L-羥* L-Hydroxyproline 51-35-4 C5H9NO3 131.13 20mg
32429 α-蒎烯(95%)人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒 α-Pinene 2437-95-8 C10H16 136.23 20mg
32430 B-蒎烯(95%) beta-Pinene 127-91-3 C10H16 136.23 20mg
32431 蘋果酸 Malic acid 6915-15-7 C4H6O5 134.09 20mg
32432 霹靂蘿芙木堿 Perakine 4382-56-3 C21H22N2O3 350.42 10mg
32433 派立辛 Parishin 62499-28-9 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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