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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
32123 氧化石蒜堿 Lycobetaine 72510-04-4 C16H12NO3+ 266.27 20mg
32124 番茄紅素 Lycopene 502-65-8 C40H56 536.87 20mg
32125 番瀉苷A Sennoside A 81-27-6 C42H38O20 862.74 20mg
32126 番瀉苷B Sennoside B 128-57-4 C42H38O20 862.74 20mg
32127 番瀉苷C Sennoside C 37271-16-2 C42H40O19 848.76 10mg
32128 番瀉苷D Sennoside D 37271-17-3 C42H40O19 848.759 10mg
32129 茴香腦 cis-Anethol 104-46-1 C10H12O 148.2 20mg
32130 反式茴香腦 cis-Anethol 104-46-1 C10H12O 148.2 20mg
32131 茯苓酸 Pachymic acid 29070-92-6 C33H52O5 528.76 20mg
32132 3-氫化去氫松苓酸 Dehydrotrametenolic acid 454 5mg
32133 粉防己堿 Tetrandrine 518-34-3 C38H42N2O6 622.75 20mg
32134 防己諾林堿 Fangchinoline 436-77-1 C37H40N2O6 608.72 20mg
32135 佛手柑內(nèi)酯 Bergapten 484-20-8 C12H8O4 216.19 20mg
32136 異佛手柑內(nèi)酯 Isobergapten 482-48-4 C12H8O4 216.18952 20mg
32137 扶桑甾醇 beta-rosasterol 10mg
32138 芳樟醇 Linalool 78-70-6 C10H18O 154.25 20mg
32139 附子靈 Fuziline C24H39NO7 20mg
32140 覆盆子酮 4-(4-Hydroxyphenyl)-2-butanone 5471-51-2 C10H12O2 164.2 20mg
32141 風(fēng)信子素 2-(1-Ethoxyethoxy)ethyl)benzene 2556-10-7 C12H18O2 194.27 20mg
32142 法卡林二醇 Falcarindiol 55297-87-5 C17H24O2 260.37 10mg
32143 羌活醇 Notopterol 88206-46-6 C21H22O5 354.4 20mg
32144 肥皂草素(UV98%) Saponin 8047-15-2 C27H42O3 20mg
32145 甘草酸 Glycyrrhizic acid 1405-86-3 C42H62O16 822.93 20mg
32146 *鹽 Glycyrrhizic acid ammonium salt 53956-04-0 C42H65NO16 839.96 20mg
32147 * Diammonium glycyrrhizinate 79165-06-3 C42H62O16.2H3N 856.997 20mg
32148 甘草苷 Liquiritin 551-15-5 C21H22O9 418.396 20mg
32149 異甘草苷 Isoliquiritin 5041-81-6 C21H22O9 418.39 20mg
32150 甘草次酸 18 β-Glycyrrhetintic Acid 471-53-4 C30H46O4 470.68 20mg
32151 光甘草定 Glabridin 59870-68-7 C20H20O4 324.37 20mg
32152 甘草查爾酮A Licochalcone A 58749-22-7 C21H22O4 338.4 20mg
32153 甘草查爾酮B Licochalcone B 58749-23-8 C16H14O5 20mg
32154 甘草查爾酮C Licochalcone C 144506-14-9 C21H22O4 20mg
32155 甘草素 Liquiritigenin 578-86-9 C15H12O4 256.25 20mg
32156 異甘草素 Isoliquiritigenin 961-29-5 C15H12O4 256.25 20mg
32157 水甘草堿 Tabersonine 4429-63-4 C21H24N2O2 336.43 20mg
32158 * Podophyllotoxin 518-28-5 C22H22O8 414.41 20mg
32159 *-4-O-葡萄糖苷 Podophyllotoxin-4-O-glucoside 16481-54-2 C28H32O13 10mg
32160 4'-去甲基表* 4'-Demethylepipodophyllotoxin 6559-91-7 C21H20O8 400.38 20mg
32161 * Puerarin 3681-99-0 C21H20O10 432.38 20mg
32162 3'-甲氧基* 3’- Methoxy Puerarin 117047-07-1 20mg
32163 4'-O-甲基* 4'-O-Methylpuerarin
92117-94-7
C22H22O9 430.41 10mg
32164 3'-羥基* 3'-hydroxy Puerarin 117076-54-5 20mg
32165 鉤吻堿 Gelsemine 509-15-9 C20H22N2O2 322.4 20mg
32166 鉤吻素子 koumine 1358-76-5 C20H22N2O2 306.407 20mg
32167 高良姜素 3,5,7-Trihydroxyflavone 548-83-4 C15H10O5 270.24 20mg
32168 三尖杉?jí)A Cephalotaxlen 24316-19-6 C18H21NO4 315.36 20mg
32169 * Homoharringtonine 26833-87-4 C29H39NO9 545.62 20mg
32170 鉤藤堿 Rhynchophylline 76-66-4 C22H28N2O4 384.47 20mg
32171 去氫鉤藤堿 Corynoxeine 630-94-4 C22H26N2O4 20mg
32172 異去氫鉤藤堿 Isocorynoxeine 51014-29-0 C22H26N2O4 382.45 20mg
32173 異鉤藤堿 Isorhychophylline 6859-1-4 C21H26N2O4 370.446 20mg
32174 根皮素 Phloretin 60-82-2 C15H14O5 274.27 20mg
32175 根皮苷 Phloridzin 7061-54-3 C21H24O10 436.41 20mg
32176 格列風(fēng)內(nèi)酯 Griffonilide 61371-55-9 C8H8O4 168.04 20mg
32177 果糖 beta-D-Fructopyranose 7660-25-5 C6H12O6 180.16 20mg
32178 古倫賓 Columbin C20H22O6 358.39 20mg
32179 瓜子金皂苷己人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒 Polygalasaponin F 20mg
32180 枸櫞酸 Citric acid monohydrate 5949-29-1 C6H10O8 210.14 20mg
32181 甘露糖 D-Mannitol 69-65-8 C6H14O6 182.17 20mg
32182 甘油三油酸酯 Triolein
122-32-7 C57H104O6 885.43 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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