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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-22 10:17:13瀏覽次數(shù):159次
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人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
30105 m-TEC瓊脂 用于水中耐熱細菌濾膜計數(shù)(Acumedia方法)
30106 現(xiàn)隱肉湯 用于水中大腸菌群計數(shù)(US-EPA方法)
30107 醋酸鹽瓊脂 用于細菌醋酸鹽試驗
30108 水平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 用于飼料中細菌總數(shù)測定
30109 R2A 瓊脂 用于飲用水中異生細菌分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)
30110 心浸液瓊脂 用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
30111 桔汁瓊脂 用于飲料中耐酸細菌的分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)
30112 CATC瓊脂 用于食品和飲料腸球菌的分離培養(yǎng)(MERCK方法)
30113 EEM培養(yǎng)基 用于致病性大腸桿菌的增菌培養(yǎng)和腸桿菌的增菌培養(yǎng)(Japan方法)
30114 胰蛋白胨膽鹽瓊脂 用于大腸桿菌的膜過濾法選擇性培養(yǎng)(ISO標(biāo)準(zhǔn))
30115 膽鹽七葉苷瓊脂 250 用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)
30116 VRBG 瓊脂 250 用于奶粉中坂崎桿菌的分離培養(yǎng)(FDA方法)
30117 TSA 瓊脂 250 用于奶粉中坂崎桿菌的純化培養(yǎng)(FDA方法)
30118 胰蛋白胨大豆肉湯 250 用于*的MPN測定,增菌培養(yǎng),NaCl濃度可根據(jù)需要而調(diào)整(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30119 Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) 250 用于*的選擇性分離培養(yǎng)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30120 亞碲酸鹽卵黃增菌液 5ml*10 加入Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中
30121 兔血漿 0.5ml*20 用于*凝固酶試驗
30122 DNA酶瓊脂 100 用于核糖核酸酶檢測
30123 7.5%氯化鈉肉湯 250 用于*的增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
30124 腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基 250 用于*腸毒素產(chǎn)毒試驗
30125 亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
30126 葡萄球菌增菌肉湯 250 用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性增菌
30127 葡萄球菌選擇性瓊脂 250 用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
30128 北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉0.2ml
30129 葡萄球菌選擇性瓊脂110(CHAPMAN 瓊脂) 250 用于*的分離培養(yǎng)
30130 *卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于*的分離培養(yǎng)(Japan方法)
30131 V-J瓊脂 250 病源標(biāo)本和其它標(biāo)本中*陽性*的選擇性分離(Merck方法)
30132 改良Giolitti-Cantobi 肉湯 250 用于*的增菌培養(yǎng)
30133 TMP瓊脂培養(yǎng)基 250 用于*的分離培養(yǎng)
30134 緩沖蛋白胨水(BPW) 250 用于沙門氏菌前增菌培養(yǎng),亦可用于李氏菌前增菌培養(yǎng)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30135 四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB) 250 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng),需加入煌綠和碘液(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30136 膽硫乳瓊脂(DHL) 250 腸道菌選擇性培養(yǎng)基,特別是沙門氏菌的選擇性分離(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30137 三糖鐵瓊脂(TSI) 250 生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細菌的生化反應(yīng)篩選(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30138 SS 瓊脂 250 用于沙門氏菌,志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
30139 亞利桑那菌瓊脂(SA) 100 用于亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離(SN標(biāo)準(zhǔn))
30140 氯化鎂孔雀綠肉湯(MM,RV Medium) 250 用于沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
30141 HE 瓊脂(HE) 250 用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(FDA標(biāo)準(zhǔn))
30142 賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 5 生化培養(yǎng)基,賴氨酸脫羧酶試驗(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30143 尿素酶瓊脂基礎(chǔ) 250 生化培養(yǎng)基,用于細菌脲酶檢測(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30144 40%尿素水 5ml*10 加入尿素酶瓊脂基礎(chǔ)
30145 V-P 半固體瓊脂 250 生化培養(yǎng)基,用于細菌V-P試驗(SN標(biāo)準(zhǔn))
30146 吲哚培養(yǎng)基 10 生化培養(yǎng)基,用于細菌靛基質(zhì)試驗,亦稱*肉湯(SN標(biāo)準(zhǔn))
30147 Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒 10ml*1 吲哚(靛基質(zhì))試驗配套試劑
30148 丙二酸鈉培養(yǎng)基 10 生化培養(yǎng)基,用于細菌丙二酸鹽利用試驗(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))
30149 衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 10 生化培養(yǎng)基,用于細菌衛(wèi)予醇發(fā)酵試驗(SN標(biāo)準(zhǔn))
30150 GN 增菌液 250 主要用于志賀氏菌的增菌培養(yǎng),亦可用于沙門氏菌增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
30151 XLD 培養(yǎng)基 250 選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌(FDA標(biāo)準(zhǔn))
30152 WS 瓊脂 250 用于沙門氏菌的選擇性分離(GB標(biāo)準(zhǔn))
30153 葡萄糖銨培養(yǎng)基 250 用于志賀氏菌的葡萄糖銨試驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
30154 葡萄糖半固體培養(yǎng)基 250 用于志賀氏菌的復(fù)合生化試驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
30155 動力-吲哚-尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250 用于細菌的復(fù)合生化試驗
30156 醋酸鉛培養(yǎng)基 人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒 250 用于硫化氫試驗
30157 SIM培養(yǎng)基 250 用于硫化氫、動力、吲哚試驗
30158 乳糖肉湯 250 用于食品中沙門氏菌檢驗前增菌
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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