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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-06 17:35:58瀏覽次數(shù):320次
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人*(SS)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人*(SS)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*(SS)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質量。
29650 10246 改良胰蛋白胨大豆肉湯(mTSB)基礎 250g/瓶 用于 O157 菌選擇性增菌,每 225ml培養(yǎng)基中添加 1 支 21601
29651 10237 結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA) 250g/瓶 含乳糖、葡萄糖。用于阪崎腸桿菌 的分離(SN、USP)
29652 10302 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液基礎TTB 250g/瓶 用 于 沙 門 氏 菌 選 擇 性 增 菌 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 20315 和1 支 20316
29653 10305 HE 瓊脂 250g/瓶 用于腸道致病菌的選擇性分離
29654 10306 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂 250g/瓶 用于腸道致病菌的選擇性分離
29655 10313 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于腸道致病菌的選擇性分離
29656 10319 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM) 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性增菌
29657 10320 亞利桑那菌瓊脂(SA) 250g/瓶 用于亞利桑那菌的分離
29658 10321 WS 瓊脂 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性分離
29659 10322 RVS 肉湯 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性增菌
29660 10323 亮綠酚紅瓊脂 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性分離(GB、ISO、SN)
29661 10325 EF-18 瓊脂基礎 250g/瓶 用 于 沙 門 氏 菌 濾 膜 法 檢 驗 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 20321
29662 10356 改良亮綠瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性分離
29663 10333 MKTTn 肉湯基礎 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性增菌(ISO), 每 100ml 培養(yǎng)基中添加 1 套 20315 和新生霉素 4mg
29664 10334 賴氨酸鐵瓊脂(LIA) 250g/瓶 用于沙門氏菌賴氨酸脫梭、脫氨及 硫化氫復合生化試驗(FDA)
29665 10335 改良 MSRV 培養(yǎng)基 250g/瓶 用于沙門氏菌的選擇性分離鑒別, 每 100ml 培養(yǎng)基中需添加 1 支21607
29666 10336 BPL 瓊脂 250g/瓶 用于沙門氏菌的選擇性分離與鑒 別
29667 10337 BPLS 瓊脂 250g/瓶 用于樣本中沙門氏菌的選擇性分 離
29668 10338 改良 BPLS 瓊脂 250g/瓶 用于樣本中沙門氏菌的選擇性分 離
29669 10339 M-肉湯 250g/瓶 用于干燥食品和種子中沙門氏菌 的增菌和培養(yǎng)
29670 10341 煌綠*瓊脂(BGS 瓊脂) 250g/瓶 含*,用于沙門氏菌的選擇 性分離
29671 10342 SBG 磺胺增菌液 250g/瓶 含*,用于沙門氏菌選擇性 增菌
29672 10343 XLT4 瓊脂 250g/瓶 用于沙門氏菌等腸道致病菌的選 擇性分離
29673 10345 DCLS 瓊脂 250g/瓶 用于沙門氏、志賀氏菌分離
29674 10401 GN 增菌液 250g/瓶 用于志賀氏菌增菌
29675 10402 SS 瓊脂 250g/瓶 用于腸道菌選擇性分離
29676 10405 葡萄糖銨瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于志賀氏菌生化試驗
29677 10407 志賀氏菌增菌肉湯基礎 250g/瓶 用 于 志 賀 氏 菌 的 選 擇 性 增 菌(ISO),每 100ml 添加 0.05mg新生霉素
29678 10357 RV R10 肉湯 250g/瓶 用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)
29679 10358 Muller -Kauffmann 四硫磺酸鈉肉湯基礎 250g/瓶 用于沙門氏菌增菌,每 100ml 培 養(yǎng)基中添加 1 支 20315 和 1 支20316
29680 11702 金氏 B 培養(yǎng)基 250g/瓶 用 于 綠 膿 桿 菌 產(chǎn) 熒 光 鑒 定 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21702
29681 11703 乙酰胺肉湯 250g/瓶 用于銅綠假單胞菌產(chǎn)氨試驗
29682 11705 十六烷基*基*培養(yǎng)基 250g/瓶 用于綠膿桿菌分離培養(yǎng)
29683 11706 乙酰胺培養(yǎng)基 250g/瓶 用于綠膿桿菌分離培養(yǎng)
29684 11707 綠膿菌素測定培養(yǎng)基 250g/瓶 用于綠膿菌素測定,每 100ml 培養(yǎng) 基中添加 1 支 21702
29685 11710 溴化十六烷基*銨瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于銅綠假單胞菌的選擇性分離
29686 11713 假單胞菌 CFC 選擇性培養(yǎng)基 250g/瓶 用 于 假 單 胞 菌 選 擇 性 分 離 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21702 和21704
29687 11717 假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于銅綠假單胞菌綠膿菌素測定, 每 100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21702
29688 11726 假單胞菌分離瓊脂 250g/瓶 用于假單胞菌的檢驗
29689 11728 NAC 瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于銅綠假單胞菌的分離培養(yǎng)
29690 11730 洋蔥假單胞菌瓊脂基礎(PC) 250g/瓶 用于洋蔥假單胞菌的分離,每升培 養(yǎng)基中添加過濾除菌的 羥基噻吩 青霉溶液素(100mg)和多粘菌素 B 溶液(300,000units)
29691 11401 含 0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉湯(TSB-YE) 250g/瓶 用于李斯特氏菌的培養(yǎng)
29692 11402 含 0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE) 250g/瓶 用于李斯特氏菌純化
29693 11403 李氏增菌肉湯(LB1,LB2)基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌增菌,每 225ml 培養(yǎng) 基中添加 1 支 21401 和 1 支 21402 組成 LB1,每 200ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21416 和 1 支 21417 組成 LB2
29694 11404 PALCAM 瓊脂基礎 250g/瓶 用 于 李 斯 特 氏 菌 選 擇 性 分 離 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21403
29695 11407 Fraser 肉湯增菌液基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌增菌,每 225ml 培養(yǎng)基中添加 21407、21408、21418 各 1 支組成 Half-Fraser,每 100ml 添加 1 套支 21419、21420 組成 Fraser
29696 11408 牛津瓊脂(OXA)基礎 250g/瓶 用 于 李 斯 特 氏 菌 選 擇 性 分 離 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21409
29697 11411 EB 肉湯增菌液基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌的選擇性增菌,每225ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21410
29698 11412 改良 UVM 增菌液基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌的選擇性增菌,每225ml 培養(yǎng)基中添加 21422、21413各 1 支
29699 11413 LPM 瓊脂基礎 250g/瓶 用 于 李 斯 特 氏 菌 選 擇 性 分 離 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21414
29700 11414 LPM 瓊脂基礎(含七葉苷與檸檬酸鐵銨) 250g/瓶 用 于 李 斯 特 氏 菌 選 擇 性 分 離 , 每100ml 培養(yǎng)基中添加 1 支 21414
29701 11415 緩沖李斯特氏菌增菌肉湯基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌的選擇性增菌,每225ml 培養(yǎng)基中添加 1 人*(SS)ELISA試劑盒支 21415
29702 11416 改良 McBride 瓊脂基礎(MMA) 250g/瓶 用于李斯特氏菌的選擇性分離,每升 培養(yǎng)基中需添加 2.5g 苯乙醇及 200mg 環(huán)乙酰亞胺或 30mg *
29703 21423 改良牛津培養(yǎng)基 10 支/盒 每支用于 100ml11417 中
29704 10801 7.5%氯化鈉肉湯 250g/瓶 用于*的均質增菌
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*(SS)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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