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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人5羥色銨(5-HT)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人5羥色銨(5-HT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人5羥色銨(5-HT)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
29542 10805 腦心浸出液肉湯(BHI) 250g/瓶 用于細(xì)菌的增菌和培養(yǎng)
29543 10193 腦心浸出液瓊脂(BHIA) 250g/瓶 用于細(xì)菌尤其是苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)
29544 10204 營(yíng)養(yǎng)肉湯普通 250g/瓶 用于細(xì)菌的增菌、復(fù)壯等
29545 11009 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 250g/瓶 用于渾濁制品需氧菌無(wú)菌試驗(yàn)
29546 10116 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250g/瓶 用于低酸性罐頭食品無(wú)菌檢驗(yàn)
29547 10117 酸性肉湯 250g/瓶 用于酸性罐頭食品無(wú)菌檢驗(yàn)
29548 10114 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 250g/瓶 用于滅菌效果檢驗(yàn)
29549 11801 0.5%* 250g/瓶 用于無(wú)菌檢查
29550 10107 胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌培養(yǎng)及抑菌劑效力檢查
29551 10108 胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌培養(yǎng)及抑菌劑效力檢查
29552 10155 TGC 培養(yǎng)基 250g/瓶 用于無(wú)菌檢驗(yàn)(日本)
29553 10813 普通肉湯培養(yǎng)基 250g/瓶 用于*的增菌,也可用 于其它細(xì)菌的增菌(SN)
29554 11836 細(xì)菌保存培養(yǎng)基 250g/瓶 用于菌種培養(yǎng)與保存,可制備菌種保 存斜面(pH7.3)
29555 11704 SCDLP 液體培養(yǎng)基 250g/瓶 用于化妝品樣品的增菌,每升培養(yǎng)基 中需添加 1 支 20107
29556 11209 菌種培養(yǎng)基 250g/瓶 用于菌種培養(yǎng)與保存,可制備菌種保 存斜面(pH6.5)
29557 10158 Letheen 瓊脂基礎(chǔ) 250g/瓶 用于化妝品衛(wèi)生微生物檢測(cè),每升培 養(yǎng)基中需添加 1 支 20107
29558 10159 Letheen 肉湯基礎(chǔ) 250g/瓶 用于化妝品衛(wèi)生微生物檢測(cè),每升培養(yǎng)基中需添加 1 支 20204
29559 10160 改良 Letheen 瓊脂基礎(chǔ) 250g/瓶 用于化妝品衛(wèi)生微生物檢測(cè)(ISO), 每升培養(yǎng)基中需添加 1 支 20107
29560 10161 改良 Letheen 肉湯基礎(chǔ) 250g/瓶 用于化妝品衛(wèi)生微生物檢測(cè)(ISO), 每升培養(yǎng)基中需添加 1 支 20204
29561 10162 血瓊脂基礎(chǔ) 2 號(hào) 250g/瓶 用于細(xì)菌的培養(yǎng)、分離和鑒別需添加5-10%脫纖維羊血
29562 10163 血液* 250g/瓶 用于血液中致病菌的分離
29563 10170 Eugon 肉湯 250g/瓶 廣泛用于微生物的培養(yǎng)
29564 10171 Eugon 瓊脂 250g/瓶 廣泛用于微生物的培養(yǎng)
29565 10172 胰蛋白示磷酸鹽肉湯 250g/瓶 用于苛養(yǎng)菌的增菌和培養(yǎng)
29566 12703 小牛浸液肉湯 250g/瓶 用于苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)
29567 12704 小牛浸液瓊脂 250g/瓶 用于苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)
29568 11708 明膠培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌的明膠生化試驗(yàn)
29569 10807 *發(fā)酵培養(yǎng)基 250g/瓶 用于*發(fā)酵試驗(yàn)
29570 10140 *培養(yǎng)基 250g/瓶 用于*發(fā)酵試驗(yàn)
29571 10146 醋酸鉛培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌產(chǎn)硫化氫試驗(yàn),每 100ml培養(yǎng)基中添加 1 支 20104
29572 10147 溴甲酚紫瓊脂基礎(chǔ)(糖發(fā)酵基礎(chǔ)) 250g/瓶 選擇性添加 0.5-1%碳源,用于細(xì)菌 的分離和鑒別
29573 10148 溴甲酚紫肉湯基礎(chǔ) 250g/瓶 選擇性添加 0.5-1%碳源,用于細(xì)菌 的分離和鑒別
29574 10156 糖發(fā)酵培養(yǎng)基 250g/瓶 溴*藍(lán)為指示劑,不含碳源, 用于糖發(fā)酵試驗(yàn)(GB、藥典)
29575 10157 淀粉培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌淀粉水解試驗(yàn)
29576 10410 葡萄糖半固體瓊脂 250g/瓶 用于葡萄糖利用(產(chǎn)酸、產(chǎn)氣)實(shí) 驗(yàn)
29577 11050 石蕊牛乳培養(yǎng)基 250g/瓶 用于測(cè)定細(xì)菌對(duì)牛乳的發(fā)酵
29578 10179 丙二酸鈉培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌生化鑒定
29579 10180 蛋白胨水培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌靛基質(zhì)試驗(yàn)
29580 10346 *雙水解酶試驗(yàn)培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌的*雙水解酶試驗(yàn)
29581 10199 *脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌的*脫羧酶試驗(yàn)
29582 10100 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)對(duì)照培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌的氨基酸試驗(yàn)對(duì)照
29583 12701 緩沖葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 250g/瓶 用于細(xì)菌的 MR、VP 試驗(yàn)
29584 10103 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA) 250g/瓶 用于菌落總數(shù)測(cè)定、菌種純化和傳 代
29585 10101 平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA) 250g/瓶 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
29586 10112 R2A 瓊脂 250g/瓶 用于水中菌落總數(shù)測(cè)定
29587 10115 TTC 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 250g/瓶 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
29588 11502 胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA) 250g/瓶 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定、純化、培養(yǎng)
29589 10104 *-吐溫 80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于化妝品菌落總數(shù)測(cè)定,每升培 養(yǎng)基中添加 1 支 20107
29590 10119 胰化大豆堅(jiān)固綠瓊脂(TSFA) 250g/瓶 用于濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
29591 10120 改良平板計(jì)數(shù)瓊脂人5羥色銨(5-HT)ELISA試劑盒(MPCA) 250g/瓶 用于乳及乳制品中菌落總數(shù)、嗜冷 菌、需氧芽孢菌的測(cè)定
29592 10123 2216E 瓊脂 250g/瓶 用于海生細(xì)菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)
29593 10130 酵母粉瓊脂 250g/瓶 用于水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定(ISO)
29594 10141 CVT 瓊脂培養(yǎng)基 250g/瓶 用于乳及 乳制品中 嗜低溫 細(xì) 菌總 數(shù)的測(cè)定
29595 10142 嗜冷菌計(jì)數(shù)瓊脂 250g/瓶 用于乳及 乳制品中 嗜冷菌 菌 落總 數(shù)的測(cè)定(ISO)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人5羥色銨(5-HT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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