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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
29194 腦心浸出液肉湯 (CM0225) Oxoid
29195 脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (Hynes) (CM0227) Oxoid
29196 胰蛋白示瓊脂基礎(chǔ) (CM0233) Oxoid
29197 麥芽汁瓊脂 (CM0247) Oxoid
29198 疊氮鈉血瓊脂基礎(chǔ) (CM0259) Oxoid
29199 過敏測試診斷瓊脂 (D.S.T.A.) (CM0261) Oxoid
29200 亮綠瓊脂 (Kauffmann 培養(yǎng)基) (CM0263) Oxoid
29201 血瓊脂基礎(chǔ) No. 2 (CM0271) Oxoid
29202 Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ) (CM0275) Oxoid
29203 三糖鐵瓊脂 (CM0277) Oxoid
29204 胰蛋白示磷酸鹽肉湯 (CM0283) Oxoid
29205 3號抗生素培養(yǎng)基(Assay 肉湯) (CM0287) Oxoid
29206 C.L.E.D. 培養(yǎng)基 (CM0301) Oxoid
29207 賴氨酸脫羧酶肉湯片劑 (CM0308) Oxoid
29208 W.L.營養(yǎng)培養(yǎng)基 (CM0309) Oxoid
29209 E.E. 肉湯 (緩沖葡萄糖亮綠膽汁肉湯) (CM0317) Oxoid
29210 DNase 瓊脂 (CM0321) Oxoid
29211 平板計(jì)數(shù)瓊脂 (CM0325) Oxoid
29212 1號抗生素培養(yǎng)基(Seed 瓊脂) (CM0327) Oxoid
29213 霍亂菌培養(yǎng)基TCBS (CM0333) Oxoid
29214 Mueller-Hinton 瓊脂 (CM0337) Oxoid
29215 MRS 肉湯 (CM0359) Oxoid
29216 MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid
29217 GC 瓊脂基礎(chǔ) (CM0367) Oxoid
29218 腦心浸出液瓊脂 (CM0375) Oxoid
29219 Slanetz and Bartley 培養(yǎng)基 (腸球菌瓊脂) (CM0377) Oxoid
29220 賴氨酸鐵瓊脂 (CM0381) Oxoid
29221 巰基醋酸鹽肉湯 (另一USP配方) (CM0391) Oxoid
29222 D.C.L.S. 瓊脂 (脫氧膽酸鹽乳糖蔗糖) (CM0393) Oxoid
29223 支原體瓊脂基礎(chǔ) (CM0401) Oxoid
29224 支原體肉湯基礎(chǔ) (CM0403) Oxoid
29225 Sensitest 瓊脂 (CM0409) Oxoid
29226 Hektoen 腸瓊脂 (CM0419) Oxoid
29227 C.L.E.D. 培養(yǎng)基 (帶Andrades 指示劑) (CM0423) Oxoid
29228 Amies 轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基 (CM0425) Oxoid
29229 S.I.M. 培養(yǎng)基 (CM0435) Oxoid
29230 Schaedler Anaerobic Agar Schaedler 厭氧瓊脂 Oxoid 500G
29231 標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂 APHA (CM0463) Oxoid
29232 XLD 培養(yǎng)基 (CM0469) Oxoid
29233 Iso-Sensitest 瓊脂 (CM0471) Oxoid
29234 Iso-Sensitest 肉湯 (CM0473) Oxoid
29235 遠(yuǎn)藤氏瓊脂基礎(chǔ) (CM0479) Oxoid
29236 紫紅膽汁葡萄糖瓊脂 (CM0485) Oxoid
29237 Tinsdale 瓊脂基礎(chǔ) (CM0487) Oxoid
29238 Schaedler Anaerobic Broth /Schaedler 厭氧肉湯 Oxoid 500G
29239 W.L.營養(yǎng)肉湯 (CM0501) Oxoid
29240 紫色麥康凱肉湯 (麥康凱肉湯 (US 配方)) (CM0005a) Oxoid
29241 紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a) Oxoid
29242 無鹽麥康凱瓊脂 (CM0007b) Oxoid
29243 緩沖蛋白胨水人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒 (CM0509) Oxoid
29244 卡里-布萊爾轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基 (CM0519) Oxoid
29245 Giolitti-Cantoni 肉湯 (CM0523) Oxoid
29246 SS 改良瓊脂(CM0533) Oxoid
29247 Dermasel 瓊脂 (CM0539) Oxoid
29248 沙保氏麥芽糖瓊脂 (CM0041a) Oxoid
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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