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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-18 06:08:01瀏覽次數(shù):134次
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人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質量。
28461 嗜鹽性試驗培養(yǎng)基 250(g)
28462 氨芐*麥康凱瓊脂基礎 250(g)
28463 RS瓊脂 250(g)
28464 AHM鑒別用培養(yǎng)基 250(g)
28465 脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基 250(g)
28466 蔗糖胰蛋白胨肉湯 250(g)
28467 胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE) 250(g)
28468 胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE) 250(g)
28469 李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(MMA) 250(g)
28470 糖發(fā)酵肉湯基礎 250(g)
28471 李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎 250(g)
28472 七葉苷培養(yǎng)基 10(g)
28473 半固體動力培養(yǎng)基 250(g)
28474 牛津瓊脂(OXA)基礎 250(g)
28475 PALCAM培養(yǎng)基基礎 250(g)
28476 Fraser肉湯基礎 250(g)
28477 FB1/Half Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰) 4支/套×5(g)
28478 Fraser配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、檸檬酸鐵銨、氯化鋰) 4支/套×5(g)
28479 FB2配套試劑(吖啶黃素、萘啶酮酸、氯化鋰) 3支/套×5(g)
28480 Fraser/Half Frase/FB1添加劑(A和B) 5mL×2/套×5(g)
28481 FB2添加劑 5mL/支×10(g)
28482 Fraser肉湯/FB2基礎 250(g)
28483 Half Fraser肉湯/FB1基礎 250(g)
28484 BLEB基礎 250(g)
28485 UVM培養(yǎng)基 100(g)
28486 LPM瓊脂基礎 100(g)
28487 溴甲酚紫葡萄糖肉湯 250(g)
28488 酸性肉湯 250(g)
28489 麥芽浸膏湯 200(g)
28490 錳鹽營養(yǎng)瓊脂 250(g)
28491 錳鹽營養(yǎng)瓊脂 1000(g)
28492 庖肉培養(yǎng)基基礎 250(g)
28493 卵黃瓊脂基礎 250(g)
28494 庖肉牛肉粒 100(g)
28495 SCDLP 液體培養(yǎng)基 250(g)
28496 *吐溫80營養(yǎng)瓊脂 250(g)
28497 *吐溫80營養(yǎng)瓊脂 1000(g)
28498 乙酰胺瓊脂 250(g)
28499 十六烷*基*瓊脂 250(g)
28500 十六烷*基*瓊脂基礎 250(g)
28501 *發(fā)酵培養(yǎng)基 250(g)
28502 明膠培養(yǎng)基基礎 250(g)
28503 綠膿菌素測定培養(yǎng)基 250(g)
28504 乳糖膽鹽培養(yǎng)基 250(g)
28505 乳糖膽鹽培養(yǎng)基 1000(g)
28506 HC瓊脂基礎 250
28507 改良LETHEEN瓊脂基礎 250(g)
28508 TAT肉湯基礎 250(g)
28509 真菌培養(yǎng)基 250(g)
28510 酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基(YPD) 250(g)
28511 抗生素檢定培養(yǎng)基1號(pH 7.9±0.1) 250(g)
28512 抗生素檢定培養(yǎng)基1號人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒(pH 6.5-6.6) 250(g)
28513 抗生素檢定培養(yǎng)基2號(pH 7.9±0.1) 250(g)
28514 抗生素檢定培養(yǎng)基2號(pH 6.5-6.6) 250(g)
28515 抗生素檢定培養(yǎng)基3號 250(g)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人鈣調素(CAM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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