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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-15 03:57:10瀏覽次數(shù):375次
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人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
27750 哈巴苷 Harpagide ≥96%
27751 海柯皂苷元 hecogenin ≥95%
27752 *(粉防己堿) d-Tetrandrine ≥98%
27753 漢防己乙素(防己諾林堿) Hanfangchin B(Fangchinoline) ≥98%
27754 漢* Wogonoside 98%
27755 漢黃芩素 Wogonin ≥98%
27756 何首烏苷/2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside ≥97%
27757 和厚樸酚 Honokiol ≥98%
27758 荷葉堿 Nuciferine 98%
27759 黑介子苷 Sinigrin ≥97%
27760 紅景天苷 Salidroside ≥98%
27761 *A Erythromycin A ≥98%
27762 葒草苷 Orientin 97%
27763 厚樸酚 Magnolol ≥98%
27764 胡黃連苷-Ⅲ Picroside-Ⅲ ≥97%
27765 胡黃連苷I Amphicoside Ⅰ ≥98%
27766 胡黃連苷II Amphicoside II ≥98%
27767 胡椒堿 Piperine ≥98%
27768 胡麻屬苷 Sesamoside ≥99%
27769 *B Cucurbitacin B ≥98%
27770 槲皮苷 Quercitrin ≥97%
27771 槲皮素 Quercetin ≥98% ≥96%
27772 槲皮素-3-O-葡萄糖苷 Isoquercitrin ≥98%
27773 虎杖苷 Polydatin ≥98%
27774 華蟾酥毒基 Cinobufagin 98%
27775 樺木醇 Betulinol ≥95%
27776 * sophoridine 98%
27777 槐果堿 Sophocarpine ≥98%
27778 槐角苷 Sophoricoside ≥98%
27779 環(huán)孢菌素A Cyclosporin A ≥98%
27780 環(huán)孢菌素C Cyclosporin C ≥95%
27781 環(huán)孢菌素D Cyclosporin D ≥95%
27782 環(huán)孢菌素H Cyclosporin H ≥97%
27783 環(huán)黃芪醇 cycloastragenol 96%
27784 黃柏堿 Phellodendrine 97%
27785 黃柏酮 Obacunone ≥95%
27786 黃豆黃苷 Glycitin ≥99%
27787 黃豆黃素 Glycitein ≥99%
27788 黃獨素B diosbulbin-B ≥95%
27789 黃花菜木脂素A Cleomiscosin A ≥95%
27790 黃華堿 Thermopsine ≥98%
27791 黃芪甲苷 Astragaloside IV ≥98%
27792 黃芪皂苷-Ⅰ AstragalosideⅠ ≥98%
27793 黃芪皂苷-Ⅱ Astragaloside -Ⅱ ≥98%
27794 黃芪皂苷-Ⅲ Astragaloside -Ⅲ ≥98%
27795 黃杞苷 Engeletin ≥98%
27796 * Baicalin ≥98%
27797 黃芩素人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒 Baicalein ≥98%
27798 灰氈毛忍冬皂苷乙 Macranthoidin B ≥97%
27799 茴芹內(nèi)酯(茴芹香豆素) Pimpinellin ≥98%
27800 積雪草苷 Asiaticoside ≥97%
27801 積雪草酸 Asiatic acid ≥97%
27802 吉馬酮 Germacrone ≥98%
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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