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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-02-22 03:50:21瀏覽次數(shù):188次
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人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
27146 25-羥基-原人參三醇 25-OH-Protopanaxtiol ≥97%
27147 2-O-沒食子?;鸾z桃苷 2-O-galloylhyperin ≥98%
27148 2-羥基澤蘭內(nèi)酯 2-Hydroxyeupatolide ≥97%
27149 3’-甲氧基-5’-羥基異黃酮-7- O-β-D-葡萄糖苷 3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside 95%
27150 4-羥基-L-異* 4-Hydroxyisoleucine ≥98% ≥97%
27151 4'-去甲基表* 4'-Demethylepipodophyllotoxin ≥95%
27152 5-羥基* 5-HTP ≥98%
27153 6-姜酚 6-Gingerol ≥98%
27154 6-姜烯酚 6-Shogaol
≥95%
27155 7-木糖基-* 7-xylosyltaxol ≥95%
27156 7-乙基-10-羥基* 7-Ethyl-10-Hydroxycamptothecin ≥98%
27157 7-乙基* 7-Ethylcamptothecin ≥98%
27158 8-O-乙酰山梔苷甲酯 8-O-acetylshanzhiside methyl ester 97%
27159 8-甲氧基補(bǔ)骨脂素 8-Methoxypsoralen ≥98%
27160 8-姜酚 8-Gingerol ≥95%
27161 9-氨基* 9-Aminocamptothecin ≥98%
27162 Alpha-* Alpha-asarone ≥98%
27163 Apiosylskimmin Apiosylskimmin ≥98%
27164 Menisdaurin Menisdaurin ≥98%
27165 Rosiridin Rosiridin ≥95%
27166 α-倒捻子素 α-Mangostin ≥98%
27167 β- 蛻皮甾酮 β-Ecdysone ≥99%
27168 β-倒捻子素 β-Mangostin ≥98%
27169 γ-日蟾毒配質(zhì) γ-Bufotalin ≥98%
27170 阿馬堿 Ajmalicine ≥98%
27171 安格洛苷C Angoroside C ≥98%
27172 安石榴苷 Punicalagin ≥97%
27173 安五脂素 Anwuligan ≥98%
27174 巴卡丁III Baccatin III ≥98%
27175 白花丹醌(白花丹素) plumbapin 95%
27176 表沒食子兒茶素(EGC) Epigallocatechin ≥98%
27177 白花前胡丙素 Praeruptorin C ≥98%
27178 白花前胡丁素 Praeruptorin D ≥98%
27179 白花前胡素E Praeruptorin E ≥98%
27180 白樺脂酸 Betulinic acid ≥98%
27181 白屈菜堿 Chelidonine ≥98%
27182 白術(shù)內(nèi)酯 III Atractylenolide III ≥98%
27183 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ Atractylenolide I ≥98%
27184 白頭翁素 ANEMONIN ≥98%
27185 白鮮堿 Dictamnine ≥98%
27186 斑蝥素 Cantharidin ≥98%
27187 貝萼皂苷元 Bayogenin ≥98%
27188 扁塑藤素 Pristimerin ≥98%
27189 扁蓄苷 Quercetin 3-O-alpha-L-arabinoside ≥98%
27190 表兒茶素沒食子酸酯 Epicatechin gallate ≥98%
27191 表沒食子兒茶素沒食子酸酯 EGCG ≥98%
27192 檳榔堿 Arecoline hydrobromide ≥98%
27193 補(bǔ)骨脂甲素 , 補(bǔ)骨脂二氫黃酮 Bavachin 97%
27194 補(bǔ)骨脂乙素,異補(bǔ)骨脂查爾酮 Isobavachalcone 97%
27195 蒼術(shù)苷A atractyloside A ≥97%
27196 蒼術(shù)素人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒 Atractylodin ≥97%
27197 藏紅花酸 Alpha-Crocetin ≥95%
27198 岑酮 Fraxinellone ≥98%
27199 柴胡皂苷C Saikosaponin C ≥97%
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人登革熱抗體(DF-Ab)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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