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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
27092 O3-單乙酰*氨基磺酸鹽 含量測定 171208-200609 20mg
27093 乙??纱?含量測定 171209-200507 20mg
27094 ▲鹽酸甲基安非它明 含量測定 171212-200603 20mg
27095 ▲* 含量測定 171216-200403 100mg
27096 ▲* 含量測定 171217-200402 100mg
27097 ▲阿普唑侖 溶出度檢查 171218-200603 100mg
27098 ▲艾司唑侖 含量測定 171219-200102 100mg
27099 ▲* 含量測定 171220-200602 100mg
27100 ▲異戊* 檢查 171221-200402 100mg
27101 ▲苯* 含量測定 171222-200605 100mg
27102 ▲司可*鈉 檢查 171223-200402 100mg
27103 * 含量測定 171224-200403 100mg
27104 氯* 含量測定 171227-200302 100mg
27105 2-氨基-2’-氯-5-硝基二苯酮 檢查 171228-200602 100mg
27106 ▲* 含量測定 171229-200603 50mg
27107 ▲鹽酸愛康寧 20mg
27108 鹽酸甲基愛康寧 20mg
27109 苯甲酰愛康寧 含量測定 171233-200606 20mg
27110 ▲* 含量測定 171239-200504 50mg
27111 ▲(-)-4,5-α-環(huán)氧基-3,14-二羥基*喃-6-酮 檢查 171240-200502 20mg
27112 鹽酸 含量測定 171244-200704 20mg
27113 * 含量測定 171246-200301 20mg
27114 ▲氯氮卓 含量測定 171248-200702 100mg
27115 鹽酸納曲酮 含量測定 171249-200802 20mg
27116 ▲馬來酸* 含量測定 171250-200401 50mg
27117 ▲鹽酸二氫埃托啡 含量測定 171251-200402 20mg
27118 ▲* 含量測定 171252-200401 50mg
27119 ▲* 含量測定 171253-200401 100mg
27120 2-氨基-2’,5-二氯二苯甲酮(*雜質(zhì)B) 檢查 171254-200401 100mg
27121 鹽酸* 鑒別 171256-200401 100mg
27122 ▲酒石酸* 含量測定 171258-200601 100mg
27123 ▲酒石酸* HPLC法含量測定 171261-200701 50mg
27124 ▲* UV法含量測定 171262-200901 100mg
27125 (+)* 有關(guān)物質(zhì) 171263-201001 100mg
27126 ▲* HPLC法含量測定 171265-201001 100mg
27127 2-氨基-5-硝基二苯酮(*雜質(zhì)) 有關(guān)物質(zhì) 171267-201001 50mg/支
27128 2-氨基-5-氯二苯酮(氯氮卓雜質(zhì)Ⅰ) 有關(guān)物質(zhì) 171268-201001 50mg/支
27129 N-脫烷基西泮(*雜質(zhì)) 有關(guān)物質(zhì) 171270-201001 20mg
27130 10-姜酚 10-Gingerol ≥95%
27131 10-羥基* 10-Hydroxy camptothecin ≥95%
27132 10-脫乙酰巴卡丁III 10-Deacetylbaccatine III ≥99%
27133 10-硝基* 10-Nitro Camptothecin ≥97%
27134 11-氧-羅漢果皂甙V 11-oxo-mogroside V ≥98%
27135 13-乙?;?9-羥基巴卡丁III 13-Acetyl-9-dihydrobaccatin III ≥98%
27136 18B-甘草次酸 18-beta-Glycyrrhetinic acid 97%
27137 1-二十八烷醇 1-Octacosanol ≥95%
27138 1-脫氧野尻霉素 1-Deoxynojirimycin ≥95%
27139 1-乙酸基-5-去乙酰基-巴卡亭 I 1-acetoxy-5-deacetyl-baccatin I ≥98%
27140 2,3,5,4-四羥基二苯乙烯葡萄糖苷 2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside ≥98%
27141 20(22)-烯-原人參二醇 20(22)-ene-PPD ≥97%
27142 20(S)-人參皂苷人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒C-K 20(S)-Ginsenoside C-K ≥98%
27143 20(S)-原人參二醇皂苷 20(S)-Protopanaxadiol saponins ≥98%
27144 23-羥基白樺酸 Anemosapogenin ≥98%
27145 25-羥基-原人參二醇 25-OH-Protopanaxdiol ≥97%
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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