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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-06 21:57:33瀏覽次數(shù):324次
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人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
26575 胡椒(黑胡椒) TLC法鑒別 121440-200401 0.5g
26576 胡椒(白胡椒) TLC法鑒別 121441-200401 0.5g
26577 白前(柳葉白前) TLC法鑒別 121442-200501 2.0g
26578 甘木通 TLC法鑒別 121443-200501 3.0g
26579 野馬追 TLC法鑒別 121444-200401 3.0g
26580 大葉骨碎樸 TLC法鑒別 121445-200501 3.0g
26581 盾葉薯蕷 TLC法鑒別 121446-200401 3.0g
26582 水楊梅根 TLC法鑒別 121447-200601 2.0g
26583 土荊芥 TLC法鑒別 121448-200702 90g
26584 款冬花 TLC法鑒別 121449-200401 2.0g
26585 綿大戟 TLC法鑒別 121450-200401 0.1g
26586 金牛草 TLC法鑒別 121452- 3g
26587 橙皮 TLC法鑒別 121453- 1g
26588 制何首烏 TLC法鑒別 121454-200703 3g
26589 香薷 TLC法鑒別 121456-200401 3.0g
26590 雄蠶蛾(家蠶) TLC法鑒別 121457-200501 1.0g
26591 大風(fēng)子 TLC法鑒別 121458-200501 5.0g
26592 梧桐子 TLC法鑒別 121459-200501 5.0g
26593 滿山白 TLC法鑒別 121460-200401 2.0g
26594 功勞木 TLC法鑒別 121461-200401 0.5g
26595 黃芪(膜莢黃芪) TLC法鑒別 121462-200702 3.0g
26596 燈心草 TLC法鑒別 121463-200501 1.0g
26597 川楝子 薄層色譜 121464-200501 1.0g
26598 匙羹藤葉 TLC法鑒別 121465-200501 4.0g
26599 菝葜(*) TLC法鑒別 121466-200501 2.0g
26600 玉竹 TLC法鑒別 121467-200702 3.0g
26601 地耳草 TLC法鑒別 121468-200401 1.0g
26602 飛龍掌血葉 TLC法鑒別 121469-200501 1.0g
26603 朱砂根 TLC法鑒別 121470-200401 1.0g
26604 桃金娘果 TLC法鑒別 121471-200401 2.0g
26605 豨薟草 TLC法鑒別 121472- 2.0g
26606 籬欄網(wǎng) TLC法鑒別 121473-200401 2.5g
26607 金果欖 TLC法鑒別 121474-200401 0.1g
26608 板栗殼 TLC法鑒別 121475-200401 0.5g
26609 九里香(九里香) TLC法鑒別 121476-200501 1g
26610 火炭母 TLC法鑒別 121477-200501 2.0g
26611 廣天仙子 TLC法鑒別 121478-200401 1.0g
26612 蒲葵子 TLC法鑒別 121479-200602 2.0g
26613 鐵掃帚 TLC法鑒別 121480-200702 4.0g
26614 椿皮 薄層色譜 121481-200802 2.0g
26615 龍膽花(黃花龍膽) TLC法鑒別 121483-200501 0.5g
26616 蛤蟆油(中國林蛙) TLC法鑒別 121484-200501 1.0g
26617 海龍(尖海龍) 鑒別 121485-200501 1.0g
26618 五指毛桃 TLC法鑒別 121486-200501 1.0g
26619 鹿角(馬鹿) TLC法鑒別 121487-200501 0.5g
26620 溪黃草(淺紋香茶菜) TLC法鑒別 121488-200501 2.5g
26621 土鱉蟲(冀地鱉) TLC法鑒別 121489-200602 1.0g
26622 牡丹皮 TLC法鑒別 121490-200501 1.0g
26623 花生紅衣 TLC法鑒別人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒 121491-200401 2.0g
26624 預(yù)知子(三葉木通) TLC法鑒別 121492-200501 2g
26625 全葉青蘭 TLC法鑒別 121493-200501 3.0g
26626 龜甲(腹甲) TLC法鑒別 121494-200401 0.5g
26627 山茱萸 TLC法鑒別 121495-200702 0.5g
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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