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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
25919 大豆苷 含量測(cè)定 111738-200501 20mg
25920 7-羥基香豆素 含量測(cè)定 111739-200501 20mg
25921 6,7-二甲氧基香豆素 含量測(cè)定 111740-200501 20mg
25922 6-羥基-7-甲氧基香豆素 含量測(cè)定 111741-200501 20mg
25923 當(dāng)藥苷 含量測(cè)定 111742-200501 20mg
25924 正丁醇 含量測(cè)定 111743-200501 1ml
25925 1-羥基-3,4,5-*氧基山酮 含量測(cè)定 111744-200501 10mg
25926 苦玄參苷 IA 含量測(cè)定 111745-200501 20mg
25927 醋酸乙酯 含量測(cè)定 111746-200501 1ml
25928 20(S)-原人參二醇 含量測(cè)定 111747-200501 20mg
25929 20(S)-人參皂苷 Rh2 含量測(cè)定 111748-200501 20mg
25930 樟腦 GC法含量測(cè)定 111749-200601 100mg
25931 薏苡仁油 鑒別 111750-200601 0.2ml
25932 派可林酸 含量測(cè)定 111751-200601 20mg
25933 菊苣酸 含量測(cè)定 111752-200601 20mg
25934 表告依春 含量測(cè)定 111753-200601 20mg
25935 羅漢果苷Ⅴ 含量測(cè)定 111754-200601 20mg
25936 20(S)-原人參三醇 含量測(cè)定 111755-200601 20mg
25937 二苯基庚烷 A 含量測(cè)定 111757-200601 20mg
25938 11-羰基-β-乙酰乳香酸 含量測(cè)定 111760-200601 20mg
25939 桃葉珊瑚苷 含量測(cè)定 111761-200601 20mg
25940 銀杏酸 C15:1 含量測(cè)定 111762-200601 20mg
25941 20(S)-人參皂苷 F1 含量測(cè)定 111763-200601 20mg
25942 20(S)-人參皂苷 F2 含量測(cè)定 111764-200601 20mg
25943 5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黃酮 含量測(cè)定 111765-200601 20mg
25944 白頭翁皂苷 B4 含量測(cè)定 111766-200601 20mg
25945 金橙Ⅱ 檢查 111769-200701 20mg
25946 金胺O 檢查 111770-200701 20mg
25947 胭脂紅 檢查 111771-200701 20mg
25948 赤蘚紅 檢查 111772-200701 20mg
25949 酸性紅73 檢查 111773-200701 20mg
25950 月桂酸 含量測(cè)定 111774-200701 20mg
25951 山奈苷 鑒別 111775-200701 20mg
25952 匙羹藤皂苷C 檢查 111776-200701 20mg
25953 葒草苷 含量測(cè)定 111777-200801 20mg
25954 異長(zhǎng)春花苷內(nèi)酰胺 含量測(cè)定 111778-200801 20mg
25955 20(S)-人參皂苷 Rg2 鑒別 111779-200801 20mg
25956 朝藿定C 含量測(cè)定 111780-200801 20mg
25957 衛(wèi)矛醇 鑒別 111781-200901 20mg
25958 3,5-O二咖啡酰基奎寧酸 含量測(cè)定 111782-200801 20mg
25959 *隨行對(duì)照品(暫行) 指紋圖譜 111783-200801 650mg
25960 去乙酰車葉草酸甲酯 含量測(cè)定 111786-200801 20mg
25961 7,4'-二羥基黃酮 含量測(cè)定 111787-200801 20mg
25962 香葉木素 含量測(cè)定 111788-200801 20mg
25963 4'-去甲基* 含量測(cè)定 111792-200901 20mg
25964 杜柳毒苷 含量測(cè)定 111793-200901 20mg
25965 ★苯甲酰烏頭原堿 含量測(cè)定 111794-200901 20mg
25966 ★苯甲酰新烏頭原堿 含量測(cè)定 111795-200901 20mg
25967 ★苯甲酰次烏頭原堿 含量測(cè)定 111796-200901 20mg
25968 落新婦苷 含量測(cè)定人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒 111798-200901 20mg
25969 莪術(shù)二酮 含量測(cè)定 111800-201001 20mg
25970 沙苑子苷A 含量測(cè)定 111803-201001 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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