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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-18 02:14:15瀏覽次數(shù):151次
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人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
25810 丹參酮ⅡA磺酸鈉 鑒別 111605-200301 20mg
25811 芒果苷 含量測定 111607-200402 20mg
25812 金龍膽草提取物 鑒別 111608-200301 500mg
25813 甘草苷 含量測定 111610-200604 20mg
25814 苯* 鑒別 111615-200301 20mg
25815 ?;撬?含量測定 111616-200301 20mg
25816 二甲基甲酰胺 內(nèi)標物 111617-200602 0.5ml
25817 * 鑒別 111618-200301 50mg
25818 氧化鋅 UV法含量測定 111619-200301 100mg
25819 硒 含量測定 111620-200301 100mg
25820 油酸 含量測定 111621-201004 0.2ml
25821 * 含量測定 111622-200602 0.2ml
25822 柯里拉京 含量測定 111623-200301 20mg
25823 α-亞麻酸甲酯 含量測定 111624-200602 0.2ml
25824 *甲酯 含量測定 111625-200502 0.2ml
25825 5-羥甲基糠醛 鑒別 111626-200804 10mg
25826 沙棘油 鑒別 111627-200301 0.2ml
25827 2"-O-沒食子酰基金絲桃苷 含量測定 111629-200301 10mg
25828 糠酸 鑒別 111630-200301 20mg
25829 α-亞麻酸 含量測定 111631-200502 0.2ml
25830 射干苷 含量測定 111632-200501 20mg
25831 正十八烷 含量測定 111636-200402 0.2ml
25832 羥基*A 含量測定 111637-200905 20mg
25833 蛻皮甾酮 含量測定 111638-200402 10mg
25834 馬錢苷 含量測定 111640-201005 20mg
25835 正己酸 鑒別 111641-200301 0.2ml
25836 甲基* 含量測定 111642-200301 0.2ml
25837 香葉醇 含量測定 111643-200301 0.2ml
25838 * 含量測定 111645-200301 20mg
25839 D-半乳糖醛酸 UV法含量測定 111646-200301 50mg
25840 千金藤素 含量測定 111647-200301 20mg
25841 異* 鑒別 11649- 20mg
25842 苯甲醛 含量測定 111650-200802 0.5ml
25843 卡維丁 含量測定 111651-200301 20mg
25844 氧化槐果堿 含量測定 111652-200301 20mg
25845 白鮮堿 含量測定 111654-200301 20mg
25846 5-羥色胺鹽酸鹽 含量測定 111656-200401 20mg
25847 烈香杜鵑油 鑒別 111657-200301 0.2ml
25848 * 鑒別 111658-200301 0.2ml
25849 * 鑒別 111659- 30mg
25850 龍血素 A 含量測定 111660-200402 20mg
25851 木栓酮 鑒別 111663-200401 10mg
25852 表木栓醇 鑒別 111664-200401 20mg
25853 牻牛兒酮 含量測定 111665-200902 20mg
25854 二氫辣椒素 含量測定 111666-200401 20mg
25855 脫水卡維丁 含量測定 111667-200401 20mg
25856 牡荊素鼠李糖苷 含量測定 111668-200401 20mg
25857 老龍皮酸人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒(網(wǎng)脊衣酸) 111669- 10mg
25858 松果菊苷 含量測定 111670-200503 20mg
25859 醋酸辛酯 含量測定 111671-200602 0.5ml
25860 焦性沒食子酸 含量測定 111672-200401 100mg
25861 萘 含量測定 111673-200803 100mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人百日咳毒素(PT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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