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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-22 08:57:31瀏覽次數(shù):270次
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人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
25431 * 含量測定 100993-200701 100mg
25432 * 含量測定 100996-200701 100mg
25433 * UV法含量測定 100997-200701 100mg
25434 *雜質(zhì)A 檢查用 100998-200701 30mg
25435 *雜質(zhì)B 檢查用 100999-200701 30mg
25436 *雜質(zhì)C 檢查用 101000-200701 30mg
25437 *雜質(zhì)D 檢查用 101001-200701 30mg
25438 * HPLC法含量測定 101003-200801 100mg
25439 * 含量測定 101004-200801 100mg
25440 * 含量測定 101006-200701 100mg
25441 R-甲磺酸* 檢查用 101008-200701 50mg
25442 * 含量測定 101009-200701 100mg
25443 * 含量測定 101010-200701 100mg
25444 N-乙酰氨基葡萄糖 HPLC法含量測定 101011-200801 100mg
25445 去甲* IR鑒別用 101013-200701 100mg
25446 佐尼沙胺 含量測定 101014-200801 100mg
25447 *鎂 含量測定 101015-200801 100mg
25448 * 含量測定 101016-200801 100mg
25449 * 含量測定 101019-200801 100mg
25450 *雜質(zhì)A 檢查用 101020-200801 50mg
25451 *鈣 含量測定 101028-201001 100mg
25452 * 供檢查用 101032-200901 100mg
25453 * 含量測定 101033-200901 100mg
25454 鹽酸* 含量測定 101034-200801 100mg
25455 * 含量測定 101035-200901 500mg
25456 2-氨基-4-氯* 供TLC檢查用 101038-200901 50mg
25457 *雜質(zhì)I 供UV檢查用 101039-201001 50mg
25458 *雜質(zhì)Ⅲ HPLC系統(tǒng) 101040-201001 50mg
25459 * 含量測定 101041-200901 100mg
25460 * 含量測定 101044-201001 100mg
25461 * UV法含量測定 101055-201001 100mg
25462 * HPLC法含量測定 101056-201001 100mg
25463 * 含量測定 101058-200901 100mg
25464 * 含量測定 101060-201001 100mg
25465 * HPLC含量 101061-201001 100mg
25466 * 含量測定 101063-201001 100mg
25467 * 供HPLC法 101065-201001 100mg
25468 1,6-二氫-2-甲基-6-氧代 供檢查用 101066-201001 30mg
25469 * 含量測定 101076-200901 100mg
25470 * HPLC含量 101079-201001 100mg
25471 磷酸* 含量測定 101096-200901 100mg
25472 * 供HPLC法 101106-201001 100mg
25473 * 供檢查用 101109-201001 50mg
25474 * 供檢查用 101110-201001 50mg
25475 *磷酸酯 供HPLC法 101116-201001 200mg
25476 *雜質(zhì)Ⅰ 供檢查用 101121-201001 50mg
25477 *雜質(zhì)Ⅱ 供檢查用 101122-201001 50mg
25478 氨基三乙酸 供HPLC法 101123-201001 50mg
25479 2-巰基* 供檢查用 101124-201001 30mg
25480 1,3-丙二醇 供檢查用人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒 101126-201001 100mg
25481 可的松 供HPLC法 101128-201001 50mg
25482 * 供檢查用 101132-201001 50mg
25483 *雜質(zhì)I(阿托酸6β-羥基-3α-托品酯) 供HPLC含量 101135-201001 20mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗甲型肝炎病毒IgG抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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