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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-22 11:25:45瀏覽次數(shù):194次
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人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
25324 琥珀酸* 含量測定 100827-200501 100mg
25325 * 含量測定 100828-200501 100mg
25326 ▲萘磺酸* 含量測定 100829-200501 100mg
25327 * 檢查 100831-200601 100mg
25328 * 含量測定 100832-200601 100mg
25329 * 含量測定 100834-200701 100mg
25330 哌嗪 含量測定 100835-200701 100mg
25331 *對映異構(gòu)體 供檢查用 100836-201001 50mg
25332 奧美格雷鈉 含量測定 100837-200701 100mg
25333 *磺?;铮s質(zhì)D-5-甲氧基-2-{[(4-甲氧基-2-吡啶基)-甲基]-磺?;鶀-1H-苯并咪唑 檢查用 100838-200601 20mg
25334 鹽酸阿撲* 含量測定 100839-200601 100mg
25335 * 含量測定 100840-200501 100mg
25336 * 檢查用 100841-200501 100mg
25337 鹽酸* 含量測定 100842-200501 100mg
25338 鹽酸氟* 含量測定 100844-200802 100mg
25339 * 含量測定 100845-200501 100mg
25340 異喹啉物 檢查用 100846-200501 100mg
25341 對羥基苯甲酸乙酯 含量測定 100847-200501 100mg
25342 P-氨基苯甲酸異丙酯 含量測定內(nèi)標(biāo)用 100848-200701 50mg
25343 雌酮 含量測定 100849-200501 50mg
25344 對氯苯乙酰胺 檢查用 100850-200601 50mg
25345 * 含量測定 100851-200501 100mg
25346 * 含量測定 100852-200601 100mg
25347 * HPLC法含量測定 100853-200601 100mg
25348 磷酸吡哆醛丁咯地爾 IR鑒別 100854-200701 100mg
25349 磷酸吡哆醛 HPLC法含量測定 100855-200101 100mg
25350 * 含量測定 100856-200801 100mg
25351 *雜質(zhì)A 檢查用 100857-200801 50mg
25352 *雜質(zhì)B 檢查用 100858-200801 50mg
25353 * 含量測定 100859-200501 100mg
25354 * 鑒別 100860-200501 1000mg
25355 * HPLC法含量測定 100861-200601 100mg
25356 * HPLC法含量測定 100862-200701 100mg
25357 * HPLC法含量測定 100864-200601 100mg
25358 * 含量測定 100865-200601 100mg
25359 鹽酸* HPLC法含量測定 100866-200701 100mg
25360 右旋鹽酸* 檢查用 100867-200701 20mg
25361 * 含量測定 100870-200801 100mg
25362 右* HPLC鑒別,UV含量測定 100871-200801 100mg
25363 左* 檢查用 100872-200801 50mg
25364 * HPLC法含量測定 100873-200901 100mg
25365* 含量測定 100874-200501 100mg
25366 * HPLC法含量測定 100875-200901 100mg
25367 肌酸 檢查用 100876-200901 100mg
25368 肌酐 檢查用 100877-200901 100mg
25369 * 含量測定 100879-200801 100mg
25370 * 含量測定 100880-200601 100mg
25371 5-{4-[2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基]苯基亞甲基}-2,4-噻唑二酮(鹽酸*雜質(zhì)A) 檢查用 100881-200601人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒 50mg
25372 酒石酸* HPLC法含量測定 100883-200601 100mg
25373 草酸* 含量測定 100885-200601 100mg
25374 * 含量測定 100886-200601 100mg
25375 *中間體(雄烯二酮) 檢查 100887-200601 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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