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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
24721 左* 含量測(cè)定 100076- 200703 100mg
24722 * 含量測(cè)定 100077-200604 100mg
24723 膽酸 含量測(cè)定 100078-200414 200mg
24724 蘆丁 UV法含量測(cè)定 100080-200707 100mg
24725 槲皮素 含量測(cè)定 100081-200406 100mg
24726 * 檢查用 0082-9701 50mg
24727 * 含量測(cè)定 100084-200101 50mg
24728 * 含量測(cè)定 50mg
24729 硝基呋喃丙烯酸 檢查用 100086- 200703 100mg
24730 * 含量測(cè)定 100087-200610 100mg
24731 * 含量測(cè)定 100089-200301 50mg
24732 雙羥萘酸 含量測(cè)定 100090-200301 50mg
24733 * 含量測(cè)定 100091-199601 100mg
24734 *(熔點(diǎn)℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100093-200804 1g
24735 乙酰苯胺(熔點(diǎn)116℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100094-200204 1g
24736 *(熔點(diǎn)℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100095-200204 1g
24737 磺胺(熔點(diǎn)166℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100096-199404 1g
24738 茴香酸(熔點(diǎn)185℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100097-199402 1g
24739 *(熔點(diǎn)200℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100098-200804 1g
24740 雙氰胺(熔點(diǎn)℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 10099-199402 1g
24741 糖精(熔點(diǎn)229℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100100-200804 1g
24742 *(熔點(diǎn)263℃) 熔點(diǎn)對(duì)照品 100102-199404 1g
24743 水楊酸片 溶出度校正片 100103-200610 20片/瓶
24744 * 鑒別 0105-9902 50mg
24745 水楊酸 含量測(cè)定 100106-200303 50mg
24746 α-甲基吡啶 檢查用 100109-200201 50mg
24747 * 檢查用 100110-200602 100mg
24748 * 含量測(cè)定 10111-0103 50mg
24749 * 含量測(cè)定 100113-200603 200mg
24750 * 檢查用 100114-199101 50mg
24751 * 含量測(cè)定 100115-200703 100mg
24752 鹽酸吡哆辛 含量測(cè)定 100116-200502 100mg
24753 * 含量測(cè)定 100117-200504 100mg
24754 * 含量測(cè)定 100118-200403 50mg
24755 * 含量測(cè)定 100119-200603 100mg
24756 * 含量測(cè)定 100120-200403 100mg
24757 * 含量測(cè)定 100121-199903 50mg
24758 醋酸* 含量測(cè)定 100122-200804 100mg
24759 * 含量測(cè)定 100123-200303 50mg
24760 醋酸*龍 含量測(cè)定 100124-200303 50mg
24761 醋酸* 含量測(cè)定 10125- 200404 50mg
24762 * 含量測(cè)定 100126-200402 50mg
24763 膽石酸 檢查用 100127-199701 50mg
24764 * 含量測(cè)定 10128-0201 50mg
24765 * HPLC法含量測(cè)定 100129-200804 50mg
24766 *堿 含量測(cè)定 100130-200502 50mg
24767 對(duì)甲苯磺酰胺 檢查用 100131-199501 50mg
24768 對(duì)羥基苯乙酰胺 檢查用 100132-199701 50mg
24769 * 含量測(cè)定 100133-200602 100mg
24770 * 含量測(cè)定 0134-9302 50mg
24771 * 含量測(cè)定人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒 10135-200404 50mg
24772 10%A晶型* 檢查用 100136-199301 50mg
24773 過(guò)氧苯甲酰 鑒別 100137-200701 100mg
24774 * 含量測(cè)定 100138-200603 100mg
24775 * 鑒別 100139-199702 50mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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