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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-02-15 10:40:40瀏覽次數(shù):155次
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人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
24115 達氟沙星 標準品 CAS號:112398-08-0 100MG
24116 滴滴涕(4.4-DDT) 標準品 CAS號:50-29-3 100MG
24117 滴滴涕及其代謝物 套裝 1ml
24118 溴氰菊酯,四溴菊酯 標準品 CAS號:52918-63-5 250MG
24119 溴氰菊酯,四溴菊酯標準品 CAS號: 52918-63-5 100MG
24120 甲基內(nèi)吸磷 標準品 CAS號:919-86-8 50MG
24121 甜菜安 標準品 CAS號:13684-56-5 250MG
24122 * 標準品 CAS號:.50-2-2 250MG
24123 丁嘧脲 標準品 CAS號:80060-09-9 250MG
24124 燕麥敵 標準品 CAS號:2303-16-4 100MG
24125 敵菌凈 標準品 CAS號:5355-16-8 100MG
24126 二嗪磷 標準品 CAS號:333-41-5 250MG
24127 熊脫氧膽酸標準品 CAS號: 141-03-7 100MG
24128 麥草畏 標準品 CAS號:1918-00-9 250MG
24129 敵草腈 標準品 CAS號:1194-65-6 250MG
24130 除線磷 標準品 CAS號:97-17-6 250MG
24131 抑菌靈 標準品 CAS號:1085-98-9 250MG
24132 二氯萘醌 標準品 CAS號:117-80-6 250MG
24133 二氯喃 標準品 CAS號:99-30-9 250MG
24134 2,4-滴丙酸 標準品 CAS號:120-36-5 250MG
24135 敵敵畏 標準品 CAS號:62-73-7 #數(shù)字!
24136 地克珠利 標準品 CAS號:101831-37-2 100MG
24137 芐氯三唑醇 標準品 CAS號:75736-33-3 250MG
24138 氯甲草 標準品 CAS號:51338-27-3 250MG
24139 三氯殺螨醇標準品 CAS號: 115-32-2 100MG
24140 百治磷 標準品 CAS號:141-66-2 100MG
24141 地昔尼爾 標準品 CAS號:112636-83-6 100MG
24142 苯醚甲環(huán)唑 標準品 CAS號: 0.25g
24143 野燕枯 標準品 CAS號:43222-48-6 1000mg
24144 二氟沙星 標準品 CAS號: 0.1g
24145 除蟲脲 標準品 CAS號:35367-38-5 1000mg
24146 吡氟酰草胺 標準品 CAS號:35367-38-5 250mg
24147 二氟吡隆 標準品 CAS號:109293-98-3 100mg
24148 雙氫鏈霉索 標準品 CAS號: 5490-27-7 10ml
24149 異戊乙凈 標準品 CAS號:22936-75-0 250mg
24150 二甲吩草胺 標準品 CAS號:87674-68-8 100mg
24151 落長靈 標準品 CAS號:55290-64-7 1000mg
24152 樂果 標準品 CAS號:60-51-5 100mg
24153 烯酰嗎啉 標準品 CAS號:110488-70-5 100mg
24154 二硝托胺 標準品 CAS號:148-01-6 2ml
24155 消螨普 標準品 CAS號:39300-45-3 250mg
24156 達諾殺 標準品 CAS號:88-85-7 100mg
24157 呋蟲胺 標準品 CAS號:165252-70-0 10ml
24158 特樂酚 標準品 CAS號:1420-07-1 250mg
24159 標準品 CAS號:63837-33-2 250mg
24160 敵殺磷(敵惡磷)標準品 CAS號: 78-34-2 0.1g
24161 雙苯酰草胺 標準品 CAS號:957-51-7 250mg
24162 二苯胺 標準品 CAS號:122-39-4 250mg
24163 標準品 CAS號 136-45-8 100mg
24164 敵草快 標準品人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒 CAS號:6385-62-2 250mg
24165 乙拌磷 標準品 CAS號:298-04-4 250mg
24166 二噻農(nóng) 標準品 CAS號:3347-22-6 250mg
24167 氟硫草定 標準品 CAS號:97886-45-8 100mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人粒細胞特異性抗核抗體(GS-ANA)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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