人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法：
1)目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照；與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性；P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑；P／N小于1．5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。

23199 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 140659-200401 8mg/支
23200 氟尿苷 對(duì)照品 鑒別 140660-200401 10mg/支
23201 次黃嘌呤 對(duì)照品 次黃嘌呤HPLC含量測(cè)定用 140661-200301（暫行） 20mg/支
23202  對(duì)照品 次黃嘌呤HPLC含量測(cè)定系統(tǒng)適應(yīng)性用 140662-200301 20mg/支
23203 * 標(biāo)準(zhǔn)品 *含量與鑒別 140664-200501 5mg/支
23204 * 標(biāo)準(zhǔn)品 HPLC法含量及效價(jià)測(cè)定用 140665-200501 1ml/支
23205 * 對(duì)照品 HPLC含量 140666-200501 50mg/支
23206 D-核糖 對(duì)照品 含量測(cè)定 140668-200301 10mg/支
23207 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 140669-200401 50mg/支
23208 * 對(duì)照品 鑒別、HPLC法檢查 140670-200501 4mg/支
23209 乙酰半* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140671-200501 100mg/支 
23210 N-乙酰-L-* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140672-200501 100mg/支 
23211 L-* 對(duì)照品 供鑒別及含量測(cè)定用 140673-200405 50mg/支
23212 * 對(duì)照品 鑒別 140674-200401 10mg/支
23213 胞磷*鈉 對(duì)照品 HPLC含量測(cè)定 140675-200401 100mg/支 
23214 苯* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140676-200405 50mg/支
23215 L-* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140677-200405 50mg/支
23216 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140680-200401 100mg/支
23217 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140681-200401 100mg/支
23218 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140682-200401 100mg/支
23219 異* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140683-200401 100mg/支
23220 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140684-200401 100mg/支
23221 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140685-200401 100mg/支
23222 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140686-200401 100mg/支
23223 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140687-200401 100mg/支
23224 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140688-200401 100mg/支
23225 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140689-200401 100mg/支
23226 L-* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140690-200401 100mg/支
23227 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140691-200401 100mg/支
23228 * 對(duì)照品 鑒別 140692-200301 200mg/支
23229 鹽酸* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140693-200401 100mg/支
23230 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 140697-200501 2ml/支
23231 * 對(duì)照品 鑒別 140700-200401 25mg/支
23232 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 140701-200401 15mg/支
23233 N-（2）-L-丙氨酰-L-* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140702-200501 100mg/支
23234 去羥* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140703-200401 100mg/支
23235 琥珀酰明膠 對(duì)照品 含量測(cè)定 140704-200401 700mg/支
23236 L-* 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 140705-200401 600mg/支
23237 還原型* 對(duì)照品 含量測(cè)定 140706-200401 200mg/支
23238 胸腺嘧啶 對(duì)照品 有關(guān)物質(zhì)檢查 140708-200401 100mg/支
23239 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 140709-200401 50mg/支
23240 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 140710-200401 20mg/支
23241 * 對(duì)照品 HPLC含量測(cè)定 140711-200401 266ug/支
23242 脫氧核糖胞嘧啶核苷酸鈉 對(duì)照品 脫氧核糖核酸鈉HPLC含量 140715-200501 20mg/支
23243 脫氧核糖腺嘌呤核苷酸鈉 對(duì)照品 脫氧核糖核酸鈉HPLC含量 140716-200501 20mg/支
23244 脫氧核糖胸腺嘧啶核苷酸鈉 對(duì)照品 脫氧核糖核酸鈉HPLC含量 140717-200501 20mg/支
23245 脫氧核糖*核苷酸鈉 對(duì)照品 脫氧核糖核酸鈉HPLC含量 140718-200501 20mg/支
23246 一磷酸腺苷二鈉 對(duì)照品 二丁酰*鈣薄層鑒別 140719-200501 20mg/支
23247 r-* 對(duì)照品 *片薄層鑒別 140723-200501 20mg/支
23248 * 對(duì)照品 *HPLC含量 人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒140728-200501 10mg/支
23249 * 對(duì)照品 鑒別用 140731-200501 1.6PNA單位/支
23250 *酶（大腸桿菌） 對(duì)照品 供*酶鑒別用 140732-200501 5mg/支
23251 *酶（歐文菌） 對(duì)照品 供*酶鑒別用 140733-200501 5mg/支

下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：
1 選擇試劑：選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣：可能原因： 
1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 
2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法： 
1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育：可能原因： 
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 
1) 貼封片或加蓋； 
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板：可能原因： 
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 
1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 
2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒顯色：可能原因： 
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止：可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板：如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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