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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-06 20:55:10瀏覽次數(shù):105次
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人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。
人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
23035 *S異構(gòu)體 對照品 檢查 0412-9601 50mg
23036 醌式* 對照品 檢查 130413-200303 100mg
23037 3-甲基*SV 對照品 檢查 0414-8702 50mg
23038 α-苯* 對照品 檢查 130415-200503 50mg
23039 7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸 對照品 有關(guān)物質(zhì)檢查 130416-200504 50mg
23040 無味*A晶型 對照品 檢查 0417-8701 100mg
23041 無味*B晶型 對照品 檢查 0418-8701 100mg
23042 * 對照品 含量測定 130419-200103 200mg
23043 * 對照品 含量測定 130420-200304 200mg
23044 * 對照品 含量測定 0421-9603 200mg
23045 * 對照品 含量測定 130422-200404 100mg
23046 * 對照品 含量測定 0423-9902 200mg
23047 * 對照品 含量測定 130424-200303 8mg
23048 琥乙* 對照品 檢查 0425-200002 200mg
23049 * 對照品 含量測定 0426-9101 200mg
23050 * 對照品 含量測定 130427-200306 200mg
23051 *雜質(zhì)A 對照品 檢查 130428-200503 100mg
23052 克拉維酸 對照品 含量測定 130429-200203 50mg
23053 舒巴坦 對照品 含量測定 130430-200305 200mg
23054 * 對照品 含量測定 0431-9501 200mg
23055 * 對照品 含量測定 130432-200407 100mg
23056 * 對照品 HPLC法含量測定 130433-200502 50mg
23057 雙氫苯* 對照品 檢查 130434-200202 100mg
23058 α-對羥基苯* 對照品 檢查 130435-200502 30mg
23059 *二醇物 對照品 檢查 130436-200503 50mg
23060 * 對照品 含量測定 130437-200502 200mg
23061 絲裂霉素 對照品 含量測定 130438-200502 50mg
23062 乙酰苯胺 標準試劑 130440-200202 200
23063 *酶 標準試劑 / 2ml
23064 咪唑試劑 標準試劑 / 100g
23065 對乙酰氨基苯甲醚 標準試劑 / 200mg
23066 庚烷磺酸鈉 標準試劑 / 5g
23067 3-乙氧基-4-羥基苯甲醛 標準試劑 系統(tǒng)適用性 130447-200501 100mg
23068 2-苯乙酰胺 標準試劑 系統(tǒng)適用性 130448-200501 65mg
23069 * 對照品 含量測定 130450-200304 200mg
23070 * 對照品 含量測定 130451-200302 200mg
23071 * 對照品 含量測定 0452-200001 200mg
23072 * 對照品 含量測定 0453-9901 200mg
23073 * 對照品 含量測定 130454-200403 100mg
23074 左* 對照品 含量測定 130455-200503 100mg
23075 * 對照品 含量測定 130458-200301 100mg
23076 培氟沙星 對照品 含量測定 130459-200301 100mg
23077 * 對照品 含量測定 130461-200501 200mg
23078 * 對照品 含量測定 130480-200302 200mg
23079 * 對照品 含量測定 130481-200503 100mg
23080 苯唑西林 對照品 含量測定 0482-9901 500mg
23081 * 對照品 含量測定 130483-200303 200mg
23082 * 對照品 含量測定 130484-200502 100mg
23083 * 對照品 含量測定 0485-9901 200mg
23084 *磷酸酯 對照品 含量測定 130486-200502 200mg
23085 * 對照品 含量測定人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒 130487-200302 200mg
23086 * 對照品 含量測定 130488-200403 200mg
23087 鹽酸* 對照品 含量測定 130489-200202 200mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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